本文選題：骨髓細胞 + 前體樹突狀細胞��； 參考：《南昌大學》2007年碩士論文

【摘要】： 目的:通過研究蛔蟲感染小鼠骨髓前體樹突狀細胞(precursor dendritic cells,pDCs)刺激淋巴細胞增殖的作用及其細胞毒T淋巴細胞的毒性作用,探討蛔蟲感染小鼠pDCs的免疫刺激活性。 方法: 1.動物模型的建立:用灌胃方法建立人蛔蟲-C57BL/6小鼠感染模型,按1000個/只劑量。 2.實驗分組:A—感染組DCs與感染組脾淋巴細胞混合培養(yǎng);B—感染組DCs與未感染組脾淋巴細胞混合培養(yǎng);C—未感染組DCs與感染組脾淋巴細胞混合培養(yǎng); E—用ABF沖擊未感染組的DCs后與未感染組脾淋巴細胞混合培養(yǎng);F—用B16腫瘤抗原沖擊未感染組的DCs后與未感染組脾淋巴細胞混合培養(yǎng);并設(shè)立一對照組D—未感染組DCs與未感染組脾淋巴細胞混合培養(yǎng)。通過MTT法檢測脾淋巴細胞增殖情況。共分為感染后1、11、34d三個時間段。 3.DC的誘導培養(yǎng)及鑒定:無菌條件下制備小鼠骨髓細胞(詳見全文)。培養(yǎng)體系中加入誘導分化因子培養(yǎng)其成為DCs,倒置顯微鏡下觀察DCs的生長情況。用流式細胞術(shù)檢測DCs表達CD80的情況,電鏡觀察DCs細胞形態(tài)。 4.脾細胞的分離培養(yǎng)培養(yǎng):常規(guī)無菌狀態(tài)(詳細見全文)制備小鼠脾細胞,調(diào)整細胞密度為1×106/ml,置37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 5.CTL細胞因子的表達:CTL用ELISA方法檢測培養(yǎng)72h后收集的CTL上清中IL-2,TNF-α,IFN-γ, IL-4,IL-10,IL-5的表達量。 6.繪制B16細胞生長曲線:取對數(shù)生長期的B16細胞常規(guī)消化計數(shù),準確將細胞分別接種于24孔培養(yǎng)板中,每日取3孔計數(shù),連續(xù)觀察7d。掌握靶細胞基本生長規(guī)律。 7.CTL對B16細胞的影響:將CTL作為效應(yīng)細胞,B16細胞作為靶細胞,通過MTT法檢測CTL對小鼠黑色素瘤細胞株(B16)的影響。 結(jié)果: 1. DCs培養(yǎng)不同階段細胞分化程度和形態(tài)各異,培養(yǎng)7d后,細胞表面可見明顯的樹突狀突起。透射電鏡可見典型的DCs的形態(tài)特征。同時流式細胞術(shù)檢測CD80處于高表達狀態(tài)。其中感染小鼠CD80的表達為74.53%±6.42%㖞,未感染小鼠CD80的表達為(50.12%±3.25%)。 2.細胞增值情況在感染后1d, B組OD值高于D組;在感染后11d,B組OD值稍低于D組;在感染后34d,B組OD值稍高于D組。在三個時間段的任一時間段B、D組間OD值無顯著性差異,在不同的時間段各組OD值具有顯著性差異。 3.細胞因子分泌情況,在感染后1d、11d B組CTL分泌的IL-4高于D組;在感染后34d,B組CTL分泌的IL-4低于D組。在感染后1d ,B組CTL分泌的IFN-γ高于D組;感染后11d、34d D組CTL分泌的IFN-γ高于B組。在不同時間段以及在同一時間段各組CTL分泌的IFN-γ和IL-4有顯著性的差異。但在各時間段未檢測出CTL有IL-2,IL-5,IL-10,TNF-α細胞因子的分泌。 4. B16細胞從第2d開始進入對數(shù)生長期,在第5d生長最為旺盛,之后增殖減慢逐漸進入平臺期。 5.蛔蟲感染34天時各組CTL對B16細胞的生長無抑制作用。結(jié)論: ①受感染小鼠pDCs具有免疫刺激的作用。 ②受感染小鼠pDCs能夠刺激脾淋巴細胞增殖,隨感染條件不同增殖率不同。 ③受感染小鼠pDCs誘導的CTL分泌的細胞因子IFN-γ和IL-4,隨感染條件不同表達量不同。 ④本實驗中,蛔蟲感染小鼠34dpDCs誘導的CTL對靶細胞B16細胞株的生長無抑制作用。
[Abstract]:Objective: To investigate the effect of precursor dendritic cells (pDCs) on lymphocyte proliferation and the toxicity of cytotoxic T lymphocytes in mice infected with Ascaris infection, and to explore the immune activity of pDCs in mice infected with Ascaris.
Method:
1. establishment of animal model: -C57BL/6 mouse infection model of Ascaris Ascaris was established by intragastric administration, according to 1000 doses per dose.
2. experimental groups: A - infection group DCs and infected group splenic lymphocyte mixed culture; B - infection group DCs and uninfected group splenic lymphocyte mixed culture; C - uninfected group DCs and infection group splenic lymphocyte mixed culture; E - E with ABF impact uninfected group and uninfected group splenic lymphocyte mixed culture; F - B16 tumor antigen impact The splenic lymphocytes in the uninfected group were mixed with the uninfected group, and a control group of D uninfected group DCs was mixed with the uninfected group of spleen lymphocytes. The splenic lymphocyte proliferation was detected by MTT method. The 1,11,34d three period after infection was divided into three periods after infection.
3.DC induced culture and identification: the mouse bone marrow cells were prepared under aseptic conditions (detailed in full text). In the culture system, the differentiation factor was induced to become DCs. The growth of DCs was observed under the inverted microscope. The expression of CD80 in DCs was detected by flow cytometry and the morphology of DCs cells was observed by electron microscope.
4. the isolation and culture of spleen cells: the mice splenocytes were prepared in the normal aseptic state (in detail), the cell density was 1 x 106/ml, and the cells were incubate in the 5%CO2 culture box at 37.
5.CTL cytokine expression: CTL was used to detect IL-2, TNF- alpha, IFN-, IL-4, IL-10, and IL-5 expression in CTL supernatants collected after culture 72h by ELISA.
6. plot B16 cell growth curve: take the regular digestibility count of B16 cells in logarithmic growth period, inoculate the cells in 24 hole culture plate accurately, take 3 holes per day and observe the basic growth rule of target cells continuously by 7d..
Effects of 7.CTL on B16 cells: CTL was used as the effector cell, B16 cells as target cells, and the effect of CTL on mouse melanoma cell line (B16) was detected by MTT.
Result:
1. DCs culture at different stages of cell differentiation and morphology, after culture 7d, the cell surface visible dendritic protuberance. Transmission electron microscope can see the typical morphological characteristics of DCs. Meanwhile, flow cytometry detected the high expression of CD80. The expression of CD80 in infected mice was 74.53% + 6.42%? And the expression of CD80 in the uninfected mice was (50.12) % + 3.25%).
The value of 2. cell increment was higher than that of group D after infection, and the OD value of group B was higher than that of group D after infection. After infection 11d, the OD value of B group was slightly lower than that of D group; after infection 34d, the OD value of B group was slightly higher than that of D group. There was no significant difference between B and D groups at any time period of three periods, and there was significant difference in each group of OD values at different time periods.
The secretion of 3. cell factor was higher than that of D group in 1D, 11d B group after infection, and the IL-4 of CTL secreted in 34d, B group was lower than that in the D group after infection. After infection, the secretory gamma secreted by the group was higher than that in the group. Significant differences were observed. However, CTL did not show IL-2, IL-5, IL-10 and TNF- alpha cytokine secretion at any time.
4. B16 cells entered the logarithmic growth phase from 2D, the most vigorous growth at 5D, and then gradually slowed down to platform stage.
5. CTL on the 34 day of Ascaris infection did not inhibit the growth of B16 cells.
(1) the infected mice pDCs has the effect of immune stimulation.
(2) pDCs of infected mice can stimulate the proliferation of splenic lymphocytes.
(3) cytokine IFN- gamma and IL-4 secreted by CTL induced by pDCs in infected mice were different depending on the infection conditions.
(4) in this experiment, 34dpDCs induced CTL in Ascaris infected mice had no inhibitory effect on the growth of B16 cells.
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R392

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本文編號：1918492