發(fā)布時間：2018-05-15 06:00

  本文選題：冠狀病毒 + 刺突蛋白��； 參考：《吉林大學(xué)》2005年碩士論文

【摘要】：始于中國南方并波及全球的重癥急性呼吸綜合征(severe acute respiratory syndrome ,SARS)的暴發(fā)性流行嚴(yán)重影響人類的健康和生命。WHO已經(jīng)確認(rèn)SARS病原體為一種新的冠狀病毒,命名為SARS冠狀病毒(SARS-CoV)。 研究發(fā)現(xiàn)SARS病毒刺突蛋白S2段的羧基端與鼠、牛冠狀病毒刺突蛋白S2段具有明顯的同源性。鼠、牛冠狀病毒S2段有中和抗體表位,因此SARS病毒的S2段也可能存在能夠激發(fā)中和抗體的表位。 首先我們選取抗原表位相對集中的一段基因克隆至原核表達(dá)載體pET-28上,構(gòu)建了含有SARS冠狀病毒刺突蛋白片段的表達(dá)載體pET-28a/S_2,并在大腸桿菌中獲得了高表達(dá)(50%),選擇DEAE-Sepharose FF離子交換層析純化,得到了純度在90%以上的蛋白樣品。 然后,將純化的SARS 抗原免疫小鼠,制備抗SARS 單克隆抗體。經(jīng)ELISA 檢測和篩選,獲得一株穩(wěn)定的抗SARS 刺突蛋白單克隆抗體株。該抗體能夠識別SARS 抗原結(jié)合位點(diǎn)。以制備的抗SARS 單克隆抗體為第一抗體,HRP 標(biāo)記山羊抗小鼠抗抗體為第二抗體,初步建立了SARS 刺突抗原檢測方法。
[Abstract]:The outbreak of severe acute respiratory syndrome (acute respiratory syndrome), which began in southern China and affected the whole world, has seriously affected human health and life. Who has confirmed that SARS pathogen is a new coronavirus named SARS coronavirus SARS-CoV. It was found that the carboxyl terminal of S2 segment of SARS virus spike protein had obvious homology with that of mouse and bovine coronavirus spines protein S2 segment. There are neutralizing antibody epitopes in S2 segment of bovine coronavirus, so the S2 segment of SARS virus may also have an epitope that can activate neutralizing antibody. First of all, we selected a fragment of the antigen epitope and cloned it into the prokaryotic expression vector pET-28. The expression vector pET-28a / SSP _ 2 containing SARS coronavirus stinging protein fragment was constructed, and the highly expressed protein was obtained in Escherichia coli. DEAE-Sepharose FF ion exchange chromatography was selected to purify the protein and the purity of the protein was over 90%. Then, the purified SARS antigen was immunized to prepare anti-SARS monoclonal antibody. A stable monoclonal antibody against SARS spike protein was obtained by ELISA detection and screening. The antibody can recognize the binding site of SARS antigen. Using the monoclonal antibody against SARS as the first antibody and the goat anti-mouse anti-antibody as the second antibody, a method for the detection of SARS stinging antigen was established.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1891260