本文選題：大鼠 + 成骨細(xì)胞�。� 參考：《中南大學(xué)》2006年博士論文

【摘要】：第一章 大鼠成骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)和鑒定 目的：從正常新生大鼠顱骨中分離培養(yǎng)大批成骨細(xì)胞并進(jìn)行功能鑒定，為進(jìn)一步研究作準(zhǔn)備。 方法：將新生SD大鼠處死，無菌條件下取出顱骨，剔凈后剪成1mm×1mm×1mm碎塊，0.1％膠原酶Ⅱ消化15分鐘，碎骨塊接種于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，通過觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)及鈣化結(jié)節(jié)、堿性磷酸酶染色進(jìn)行鑒定。 結(jié)果：用改良組織塊法分離的大鼠成骨細(xì)胞，在體外培養(yǎng)時(shí)可維持其在體內(nèi)的功能：合成堿性磷酸酶，最終能形成礦化結(jié)節(jié)。 結(jié)論：用改良組織塊法進(jìn)行大鼠成骨細(xì)胞培養(yǎng)，方便易行，，可分離、培養(yǎng)大量高純度成骨細(xì)胞，在體外傳代后仍保留其表型特征，可供進(jìn)一步研究使用。 第二章 尼古丁對(duì)體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞骨橋蛋白表達(dá)的影響 目的：探討尼古丁對(duì)體外培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞骨橋蛋白表達(dá)的影響。 方法：取第四代體外培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞，當(dāng)傳代細(xì)胞生長(zhǎng)至80％匯合時(shí)，分三組分別加入尼古丁、尼古丁和阿曲庫(kù)銨苯磺酸鹽(筒箭毒堿)及空白，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)。收集細(xì)胞按異硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取細(xì)胞總RNA，RT-PCR分析各組成骨細(xì)胞表達(dá)OPN mRNA的差異。提取總蛋白，Westem blotting法測(cè)定蛋白表達(dá)水平，免疫沉淀法檢測(cè)蛋白磷酸化程度。 結(jié)果：尼古丁干預(yù)組RT-PCR條帶光密度值的OPN／β-actin比值(1.35±0.08)高于對(duì)照組(0.99±0.08)及尼古丁+阿曲庫(kù)銨苯磺酸鹽干預(yù)組(1.03±0.09)，差異有顯著性(P＜0.05)；尼古丁組OPNWestern blotting的條帶光密度值(161.98±9.00)高于尼古丁+阿曲庫(kù)銨苯磺酸鹽干預(yù)組(151.10±7.99)及對(duì)照組(147.74±4.99)，其差異有顯著性(P＜0.05)；尼古丁組OPN免疫沉淀的條帶光密度值
[Abstract]:In vitro culture and identification of rat osteoblasts Aim: to isolate and culture a large number of osteoblasts from the skull of normal newborn rats and to identify the function of osteoblasts in preparation for further study. Methods: the newborn SD rats were killed, the skull was removed under aseptic condition, and the skull was cut into 1mm 脳 1mm 脳 1mm fragment 0.1% collagenase 鈪

本文編號(hào)：1886504