本文選題：脂肪組織 + 克隆��； 參考：《安徽醫(yī)科大學》2005年碩士論文

【摘要】：目的 人過氧化物酶體增殖體激活受體γ2(hPPARγ2)基因全長cDNA克隆及真核表達載體pcDNA3.1(+)/hPPARγ2的構(gòu)建。 方法 勻漿中國漢族人大網(wǎng)膜脂肪摯、提取總RNA,應(yīng)用RT-PCR方法擴增出hPPARγ2 cDNA基因全長。RT-PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳、割膠純化后,將純化的RT-PCR產(chǎn)物用Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切,與同樣經(jīng)Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切的pcDNA3.1(+)載體連接形成重組載體pcDNA3.1(+)/hPPARγ2。篩選出陽性克隆,通過限制性內(nèi)切酶酶切鑒定后對其DNA序列進行測序。 結(jié)果:從脂肪組織RNA中擴增得到1518bp目的基因片段。重組質(zhì)粒被限制性內(nèi)切酶切為兩條帶,一條為1518bp(hPPARγ2),一條為5400bp(空載體pcDNA3.1),片段的大小與理論值相符。RT-PCR擴增的hPPARγ2經(jīng)熒光測序,其結(jié)果與Genbank上hPPARγ2序列完全相同。 結(jié)論:成功克隆了人PPARγ2基因全長cDNA并成功構(gòu)建了人PPARγ2的真核表達重組體pcDNA3.1(+)/hPPARγ2。
[Abstract]:Objective to clone the full length cDNA of human peroxisome proliferator activated receptor 緯 2(hPPAR 緯 2 gene and construct the eukaryotic expression vector pcDNA3.1 (hPPAR 緯 2). Methods the whole length of hPPAR 緯 2 cDNA gene was amplified by RT-PCR method. The whole length of hPPAR 緯 2 cDNA gene was amplified by gel electrophoresis and gel electrophoresis. The purified RT-PCR product was digested with Kpn 鈪，

本文編號：1882505