本文選題：wnta + 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞��； 參考：《中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志》2014年01期

【摘要】：目的探索Wnt3a信號(hào)分子對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過(guò)程中端粒酶活性的影響。方法采用密度梯度離心聯(lián)合貼壁篩選法分離培養(yǎng)SD大鼠股骨骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。傳代后通過(guò)形態(tài)學(xué)和流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物CD29、CD44、CD45,篩選并鑒定細(xì)胞。采用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基聯(lián)合不同濃度的wnt3a(5 ng/mL、25 ng/mL、100 ng/mL)誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化,以堿性磷酸酶活性檢測(cè)評(píng)價(jià)其成骨分化能力。通過(guò)TRAP-ELISA端粒酶活性檢測(cè)法檢測(cè)在不同濃度的wnt3a干預(yù)下誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化過(guò)程中端粒酶活性的表達(dá)。結(jié)果骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞傳至第3代后可獲得均一性較高的細(xì)胞,流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物CD29、CD44高表達(dá),CD45低表達(dá)。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基聯(lián)合不同濃度的wnt3a誘導(dǎo)大鼠BMSCs 7 d后,堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)活性檢測(cè)結(jié)果:與普通成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基相比,含有5 ng/mL及25 ng/mL wnt3a的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基可顯著增加其堿性磷酸酶(ALP)活性(P0.05),而含有100 ng/mL wnt3a的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基則明顯抑制其堿性磷酸酶(ALP)活性(P0.05)。與普通成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基相比,聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過(guò)程中,端粒酶活性的改變無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論小劑量(5 ng/mL、25 ng/mL)的wnt3a分子能夠促進(jìn)體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化,而大劑量(100 ng/mL)的wnt3a分子則抑制其成骨分化。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有較弱的端粒酶活性,成骨分化過(guò)程中其活性逐漸減弱,直至消失;wnt3a信號(hào)分子刺激并不能有效激活其端粒酶活性。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of Wnt3a signaling molecules on telomerase activity during osteogenic differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells in vitro. Methods the bone marrow mesenchymal stem cells of SD rats were isolated and cultured by density gradient centrifugation and adherent screening. After passage, the cell surface markers CD29, CD44 and CD45 were detected by morphology and flow cytology to screen and identify the cells. Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) were induced by osteoblast induction medium combined with different concentrations of wnt3a(5 ng / mL1 25 ng / mL1. The osteogenic differentiation ability was evaluated by alkaline phosphatase activity test (ALP activity) in rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). Telomerase activity of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) induced by different concentrations of wnt3a was detected by TRAP-ELISA telomerase activity assay during the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into osteoblasts. Results the bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) could obtain high homogeneity after the third passage. The high expression of CD29 + CD44 and the low expression of CD45 were detected by flow cytometry. The activity of alkaline phosphatase Alkaline phosphatase (ALP) was detected after 7 days of BMSCs induced by osteogenic medium combined with different concentrations of wnt3a in rats. The results showed that the activity of ALP was higher than that of normal osteoblast induction medium. The osteogenic medium containing 5 ng/mL and 25 ng/mL wnt3a could significantly increase the activity of alkaline phosphatase (ALP), while the osteogenic medium containing 100 ng/mL wnt3a significantly inhibited the activity of alkaline phosphatase (ALP). There was no significant difference in telomerase activity during osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells induced by combined culture medium. Conclusion low dose of wnt3a (5 ng / mL) can promote osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells in vitro, while high dose of wnt3a (100 ng / mL) can inhibit the osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells. Bone marrow mesenchymal stem cells had weak telomerase activity, which decreased gradually during osteogenic differentiation, until the signal molecular stimulation of WNT3a could not effectively activate the telomerase activity of bone marrow mesenchymal stem cells.
【作者單位】： 解放軍第309醫(yī)院全軍骨科中心骨內(nèi)科;
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：1877863