本文選題：HHV-7 + gH　； 參考：《南京醫(yī)科大學(xué)》2005年博士論文

【摘要】：人類皰疹病毒7型(Human herpesvirus 7,HHV-7)是1990年首先從健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞中分離出的一種嗜淋巴細(xì)胞皰疹病毒。在人群中感染率高,主要通過唾液傳播,初次感染多發(fā)生在幼兒時(shí)期,且病毒在體內(nèi)可長(zhǎng)期持續(xù)存在。HHV-7在臨床上可能與嬰幼兒急疹、玫瑰糠疹及腎臟移植后的巨細(xì)胞病毒綜合征等有關(guān)。 HHV-7與HHV-6同屬β-皰疹病毒亞科,兩者DNA序列同源性可達(dá)到60%,相應(yīng)氨基酸序列的同源性也達(dá)到53.4%,在宿主范圍、感染方式、導(dǎo)致的臨床癥狀等方面有一定的相似性。在對(duì)HHV-6糖蛋白的研究過程中發(fā)現(xiàn),gH(與gL結(jié)合形成復(fù)合物)是HHV-6受體CD46的結(jié)合蛋白,在HHV-6入侵宿主細(xì)胞的過程起著重要的作用。針對(duì)其他皰疹病毒的糖蛋白研究也發(fā)現(xiàn)gH蛋白(與gL相互結(jié)合形成復(fù)合物)在病毒與細(xì)胞膜的融合以及感染細(xì)胞與鄰近細(xì)胞膜融合過程中起著重要作用。已知CD4分子是HIV感染細(xì)胞的重要受體,也是HHV-7感染的主要受體。HIV的gp120能夠與CD4結(jié)合,介導(dǎo)HIV入侵宿主細(xì)胞的過程。HHV-7與CD4結(jié)合的病毒蛋白尚未發(fā)現(xiàn)。尋找HH-7編碼的,與CD4結(jié)合的病毒糖蛋白,將為HIV的防治提供新思路。HHV-7糖蛋白gH是否能夠與gL結(jié)合形成復(fù)合物,其能否在病毒入侵中發(fā)揮功能,能否與CD4分子相互作用,是本論文的主要研究?jī)?nèi)容。 本研究獲得了HHV-7編碼gH、gL糖蛋白的基因及CD4的編碼基因,應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)和免疫共沉淀方法,研究了gH、gL蛋白和CD4的相互作用,并且探討了gH、gL對(duì)HHV-7感染引起CPE的影響。研究取得如下主要結(jié)果: 一、HHV-7的培養(yǎng)與鑒定 分別接種HHV-7Glasgow標(biāo)準(zhǔn)株于人的臍血單個(gè)核細(xì)胞(CBMC)和SupT1細(xì)胞系。病毒接種后10～15天,鏡檢出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)時(shí),以培養(yǎng)物DNA為模板,通過特異性引物擴(kuò)增,得到493bp的PCR產(chǎn)物。PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果與Genbank中HHV-7RK株、JI株相應(yīng)序列比對(duì),同源性達(dá)到99.9%～100%。
[Abstract]:Human herpesvirus 7 (HHV-7) was first isolated from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy people in 1990. The infection rate is high in the population, mainly transmitted by saliva. The first infection occurs in early childhood, and the virus can persist in the body for a long time. HHV-7 may be clinically associated with acute rash in infants. Pityriasis roseus and cytomegalovirus syndrome after kidney transplantation and so on. HHV-7 and HHV-6 belong to the subfamily of 尾 -herpesvirus. The homology of DNA sequence and amino acid sequence between them can reach 600.The homology of the corresponding amino acid sequence is 53.4. there are certain similarities in host range, infection mode, clinical symptoms and so on. In the study of HHV-6 glycoprotein, it was found that GH (binding to gl) is the binding protein of HHV-6 receptor CD46, which plays an important role in the invasion of host cells by HHV-6. Studies on glycoproteins of other herpes viruses have also found that gh proteins (which bind to gl to form complexes) play an important role in the fusion of viruses with cell membranes and infected cells with adjacent cell membranes. It is known that CD4 molecule is an important receptor of HIV infected cells. It is also the main receptor of HHV-7 infection. HIV gp120 can bind to CD4, and the viral protein that mediates HIV invading host cells. HHV-7 binds to CD4 has not been found. Searching for the viral glycoprotein encoded by HH-7 and binding to CD4 will provide a new idea for the prevention and treatment of HIV. Can the glycoprotein G H of HHV-7 bind to GL to form a complex, can it function in virus invasion, and can it interact with CD4 molecule? Is the main research content of this thesis. In this study, the gene encoding gHG L glycoprotein by HHV-7 and the gene encoding CD4 were obtained. The interaction between gHG L protein and CD4 was studied by yeast two-hybrid technique and immunoprecipitation method, and the effect of gHGL on CPE induced by HHV-7 infection was investigated. The main results of the study are as follows: Culture and Identification of HHV-7 HHV-7Glasgow standard strains were inoculated into human umbilical cord blood mononuclear cells (CBMC) and SupT1 cell lines respectively. When the virulent cytopathic effect was detected by microscope 10 ~ 15 days after inoculation, using the culture DNA as template, the PCR products of 493bp were amplified by specific primers, and the sequencing results of PCR products were compared with the corresponding sequences of HHV-7RK strain JI in Genbank. The homology reached 99.9%.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1866956