本文選題：信號(hào)標(biāo)簽誘變 + 噬肺軍團(tuán)菌　； 參考：《四川大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】：目的： 本文通過PCR擴(kuò)增特異信號(hào)標(biāo)簽，導(dǎo)入載體質(zhì)粒pC6，構(gòu)建信號(hào)標(biāo)簽誘變突變體文庫穿梭質(zhì)粒pC6RS；通過細(xì)菌結(jié)合配對時(shí)轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座作用，，使特異信號(hào)標(biāo)簽隨機(jī)插入到嗜肺軍團(tuán)菌的基因組中，由此構(gòu)建嗜肺軍團(tuán)菌血清10型信號(hào)標(biāo)簽誘變突變體文庫，為篩選嗜肺軍團(tuán)菌血清10型毒力基因打下基礎(chǔ)。包括二部分：1、信號(hào)標(biāo)簽誘變突變體文庫穿梭質(zhì)粒構(gòu)建；2、嗜肺軍團(tuán)菌血清10型信號(hào)標(biāo)簽誘變突變體文庫的建立。 方法： 實(shí)驗(yàn)一：信號(hào)標(biāo)簽誘變突變體文庫穿梭質(zhì)粒構(gòu)建通過PCR擴(kuò)增信號(hào)標(biāo)簽(signature tags，STs)片段，導(dǎo)入載體質(zhì)粒pC6，構(gòu)建重組質(zhì)粒pC6RS，電穿孔轉(zhuǎn)化到大腸桿菌CC118中，從CC118中提取重組質(zhì)粒pC6RS后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌S17-1中，獲得信號(hào)標(biāo)簽誘變突變體文庫穿梭質(zhì)粒。 實(shí)驗(yàn)二：嗜肺軍團(tuán)菌血清10型信號(hào)標(biāo)簽誘變突變體文庫的建立 含重組質(zhì)粒pC6RS的大腸桿菌S17-1與嗜肺軍團(tuán)茵L10結(jié)合配對，通過轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座作用，將特意信號(hào)標(biāo)簽片段隨機(jī)插入到軍團(tuán)菌的基因組中，通過營養(yǎng)依賴和抗性篩選建立嗜肺軍團(tuán)菌血清10型信號(hào)標(biāo)簽誘變突變體文庫。 結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)一：信號(hào)標(biāo)簽誘變突變體文庫穿梭質(zhì)粒構(gòu)建通過PCR擴(kuò)增信號(hào)標(biāo)簽(signature tags，STs)片段，導(dǎo)入載體pC6，構(gòu)建重組質(zhì)粒pC6RS，電穿孔轉(zhuǎn)化
[Abstract]:Objective: In this paper, the specific signal tags were amplified by PCR and introduced into vector plasmid pC6. the shuttle plasmid pC6RSwas constructed by mutagenesis of signal label, and the transposon of transposon was matched by bacterial binding. The specific signal label was inserted into the genome of Legionella pneumophila at random, and the mutant library of serotype 10 signal label was constructed, which laid the foundation for screening the virulence gene of serotype 10 of Legionella pneumophila. It includes two parts: 1, shuttle plasmid construction of signal label mutagenesis mutant library, and establishment of the library of Legionella pneumophila serotype 10 signal label mutagenesis mutant library. Methods: Experiment 1: the shuttle plasmid of signal label mutagenesis mutant library was constructed by PCR amplification of signature tag STs fragment, then introduced into vector plasmid pC6, constructed recombinant plasmid pC6RSs, electroporated into Escherichia coli CC118. The recombinant plasmid pC6RS was extracted from CC118 and transformed into Escherichia coli S17-1. The shuttle plasmid of signal label mutagenesis mutant library was obtained. The second experiment: the establishment of mutagenesis library of Legionella pneumophila serotype 10 signal label. Escherichia coli S17-1 containing recombinant plasmid pC6RS was paired with Legionella pneumophila L10, and transposon was used. The special signal tag fragment was randomly inserted into the genome of Legionella pneumophila, and the mutant library of Legionella pneumophila serotype 10 signal label mutagenesis was established by nutritional dependence and resistance screening. Results: Experiment 1: signal label mutagenesis mutant library shuttle plasmid was constructed by PCR amplification of signal tag signature tagsfest STs fragment, introduced into vector pC6, constructed recombinant plasmid pC6RSs, electroporation transformation
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R378

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本文編號(hào)：1860764