本文選題：FcγRⅡB + 慢病毒誘導(dǎo)表達(dá)載體�。� 參考：《細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志》2014年06期

【摘要】：目的構(gòu)建FcγRⅡB慢病毒誘導(dǎo)表達(dá)載體,并鑒定其在細(xì)胞中的表達(dá)。方法以人mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄獲得FcγRⅡB基因片段,并將其克隆入慢病毒表達(dá)質(zhì)粒TRE,構(gòu)建TRE-FcγRⅡB慢病毒表達(dá)重組質(zhì)粒。將慢病毒表達(dá)重組質(zhì)粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒可誘導(dǎo)質(zhì)粒Tet分別與慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,分別包裝表達(dá)病毒和可誘導(dǎo)病毒,分別測(cè)定表達(dá)病毒和可誘導(dǎo)病毒感染滴度。表達(dá)病毒和可誘導(dǎo)病毒共感染HT-1080細(xì)胞,經(jīng)梯度濃度強(qiáng)力霉素(Dox)誘導(dǎo),實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)FcγRⅡB mRNA表達(dá),免疫熒光染色檢測(cè)HT-1080細(xì)胞FcγRⅡB表達(dá),Western blot法檢測(cè)FcγRⅡB蛋白表達(dá)。結(jié)果重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、酶切及測(cè)序鑒定,測(cè)序結(jié)果顯示插入片段堿基序列與GenBank提供FcγRⅡB基因序列同源性100%。表達(dá)病毒滴度達(dá)106TU/mL,可誘導(dǎo)病毒滴度達(dá)105TU/mL,感染性良好。HT-1080細(xì)胞被病毒感染后經(jīng)Dox誘導(dǎo)表達(dá)FcγRⅡB,免疫熒光染色結(jié)果顯示FcγRⅡB能夠在HT-1080細(xì)胞中表達(dá);實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot法結(jié)果顯示FcγRⅡB表達(dá)水平與誘導(dǎo)劑濃度正相關(guān)。結(jié)論成功制備了FcγRⅡB慢病毒,感染HT-1080細(xì)胞后可實(shí)現(xiàn)FcγRⅡB的誘導(dǎo)表達(dá)。
[Abstract]:Objective to construct FC 緯 R 鈪，

本文編號(hào)：1856777