本文選題：TMB-8 + 淋巴細胞　； 參考：《暨南大學》2007年碩士論文

【摘要】： 目的： 研究胞內(nèi)鈣離子釋放阻斷劑8-(N，N-二乙胺)辛基-3，4，5-三甲氧基苯甲酸酯([8-(Diethylamino)Octyl-3，4，5-Trimethoxybenzoate]，TMB-8)對小鼠體外免疫應答和體內(nèi)遲發(fā)型超敏反應的影響，評價TMB-8的免疫抑制效應。 方法： 1．分別以刀豆蛋白A(Concanavalin A，Con A)和／或2-丁酸佛波醇酯(Phorbol12，13-dibutyrate，PDB)加離子霉素(Ionomycin，Ion)作為刺激原，以流式細胞術(shù)為基礎技術(shù)，分析TMB-8對小鼠體外淋巴細胞行為的影響：利用熒光標記抗體染色技術(shù)檢測淋巴細胞早期活化標記物CD69的表達百分率；以活體染料二乙酰羧基熒光素-琥珀酰亞胺酯(Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester，CFDA-SE)標記，分析TMB-8對淋巴細胞增殖的影響；以碘化丙啶(Propidium iodide，PI)染色分析細胞周期的分布情況。并以噻唑蘭(Monotetrazolium，MTT)比色法測定TMB-8對脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)刺激B淋巴細胞增殖的影響。 2．通過收集ConA作用下的淋巴細胞培養(yǎng)上清，以流式微球技術(shù)(Cytometric bead array,CBA)檢測分析TMB-8對該上清中Th1／Th2型細胞因子(IL-2，IFN-γ，TNF-α，IL-4，IL-5)分泌的影響。 3．利用Fluo-4／AM染色，結(jié)合流式細胞術(shù)檢測TMB-8對Con A和／或Ion作用下小鼠淋巴細胞內(nèi)Ca~(2+)濃度的影響。 4．建立動物模型，，采用二硝基氟苯(Dinitrofluorobenzene，DNFB)腹部致敏、耳廓激發(fā)的方法建立小鼠遲發(fā)型超敏反應(Delayed type hypersensitivity，DTH)模型。以耳厚差、耳重差及左耳組織切片的病理變化觀察TMB-8對小鼠DTH的影響；同時以胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)，分析TMB-8對DTH小鼠淋巴器官的影響；分離DTH小鼠的脾臟、淋巴結(jié)、胸腺分別進行細胞增殖、周期和凋亡的檢測，初步評價TMB-8在體內(nèi)的免疫學效應。 結(jié)果： 1．在所設的濃度下，TMB-8對靜息淋巴細胞無明顯影響。在Con A刺激下，四個濃度的TMB-8對CD3~+淋巴細胞的CD69~+表達均有抑制作用(P＜0.05)，且對CD3~-淋巴細胞的CD69~+表達也有明顯的抑制作用(P＜0.01)。對Con A或(PDB+Ion)刺激48h和72h下的淋巴細胞增殖呈明顯抑制效應(P＜0.01)。細胞周期分析結(jié)果表明TMB-8能抑制細胞進入S期。MTT比色法測定顯示TMB-8對B淋巴細胞增殖呈抑制效應。 2．TMB-8對Con A活化的淋巴細胞培養(yǎng)上清中Th1型(IL-2，IFN-γ，TNF-α)和Th2型(IL-4，IL-5)細胞因子的分泌均有抑制作用(P＜0.05)。 3．TMB-8對ConA或Ion所誘導的細胞內(nèi)Ca~(2+)濃度的升高有抑制作用，且隨著時間的延長，這種抑制作用越來越明顯。 4．TMB-8能夠明顯抑制DTH小鼠增加的左耳厚度差(P＜0.01)和重量差(P＜0.05)，并可減低DTH小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)(P＜0.05)。同時組織切片顯示TMB-8可明顯抑制左耳組織水腫和炎細胞浸潤。結(jié)合體外實驗結(jié)果表明，TMB-8對DTH小鼠淋巴細胞增殖有明顯的抑制作用，主要抑制細胞進入S期，并且能抑制DTH小鼠胸腺細胞的凋亡(P＜0.01)。 結(jié)論： TMB-8在體外能抑制淋巴細胞的早期活化、增殖，并且能抑制淋巴細胞進入細胞分裂周期，說明其具有免疫調(diào)節(jié)作用。同時研究還證實它能抑制ConA介導的淋巴細胞Th1型和Th2型細胞因子的分泌。TMB-8能下調(diào)Con A或Ion誘導的細胞內(nèi)Ca~(2+)濃度的上升，推測這是TMB-8發(fā)揮免疫抑制作用的基礎。在這些研究結(jié)果的基礎上，通過建立小鼠DTH動物模型，證實TMB-8在體內(nèi)能抑制T淋巴細胞介導的皮膚炎癥反應。
[Abstract]:Purpose :






The effects of 8 - ( N , N - Diethylamine ) octyl - 3 , 4 , 5 - Trimethoxybenzoate ( TB8 - 3 , 4 , 5 - Trimethoxybenzoate ) on the in vitro immune response and delayed hypersensitivity in mice were investigated .






Method :






1 . Ionomycin ( Ion ) was used as a stimulus to detect the expression of CD69 in lymphocytes in vitro by fluorescence labeled antibody staining .
The effects of T lymphocyte proliferation on lymphocyte proliferation were analyzed by labeling with biacetyl carboxyfluorescein - succinimide ester ( CFDA - SE ) in vivo .
The distribution of cell cycle was analyzed by propidium iodide ( PI ) staining , and the effects of IL - 8 on the proliferation of B lymphocytes stimulated by lipopolysaccharide ( LPS ) were determined by MTT assay .






2 . By collecting the lymphocyte culture supernatant under the action of concanavalin , the influence on secretion of Th1 / Th2 cytokines ( IL - 2 , IFN - 緯 , TNF - 偽 , IL - 4 , IL - 5 ) in the supernatant was detected by Cytometric bead array ( CBA ) .






3 . Fluo - 4 / AM staining combined with flow cytometry was used to detect the concentration of Ca ~ ( 2 + ) in lymphocytes of mouse lymphocytes induced by Con A and / or Ion .






4 . To establish an animal model , the delayed type hypersensitivity ( dth ) model was established by using dinitrobenzene ( DNFB ) abdominal sensitization and auricle excitation method .
At the same time , thymus index and spleen index were used to analyze the effect on lymphatic organs of mice .
The spleen , lymph nodes and thymus were isolated and the proliferation , cycle and apoptosis of the spleen , lymph nodes and thymus were detected , and the immunological effect in vivo was preliminarily evaluated .






Results :






1 . There was no significant effect on the expression of CD69 ~ + in CD3 ~ + lymphocytes under Con A stimulation ( P < 0 . 05 ) . There was a significant inhibitory effect on the expression of CD69 ~ + in CD3 ~ + lymphocytes ( P < 0.01 ) .






2 . The secretion of Th1 type ( IL - 2 , IFN - 緯 , TNF - 偽 ) and Th2 type ( IL - 4 , IL - 5 ) cytokines in the supernatant of Con A - activated lymphocytes was inhibited ( P < 0.05 ) .






3 . The increase of Ca ~ ( 2 + ) concentration in the cells induced by Con A or Ion has an inhibitory effect on the increase of intracellular Ca ~ ( 2 + ) concentration , and this inhibition is more and more obvious with the extension of time .






4 . The results showed that the proliferation of lymphocyte proliferation was inhibited significantly , and the apoptosis was inhibited significantly ( P & lt ; 0.01 ) .






Conclusion :






It can inhibit the proliferation of lymphocytes and inhibit the secretion of Th1 and Th2 cytokines in lymphocytes induced by Con A or Ion . The results of these studies show that it can downregulate the concentration of intracellular Ca ~ ( 2 + ) induced by Con A or Ion . It is speculated that this is the basis for the immunosuppressive effect .

【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R392

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本文編號：1849009