本文選題：臍帶干細胞 + 分離�。� 參考：《中國協(xié)和醫(yī)科大學》2007年博士論文

【摘要】： 心血管疾病嚴重威脅人類的健康，細胞移植或體外構(gòu)建組織工程移植物將是一個很有前景的治療選擇。但組織工程移植物面臨再血管化或內(nèi)皮化的問題，最近研究發(fā)現(xiàn)干細胞在體外可以分化為心肌和內(nèi)皮細胞，對細胞移植和構(gòu)建組織工程移植物有非常重要的意義。骨髓間充質(zhì)干細胞是研究最多的干細胞，但是隨著年齡的增加，骨髓間充質(zhì)干細胞的數(shù)量和體外增殖分化能力都明顯減弱，這需要我們?nèi)ふ腋玫母杉毎麃碓矗殠ЫM織是非常有希望的干細胞替代來源。 本研究的第一部分采用膠原酶消化法從臍帶組織中分離干細胞，新鮮分離的臍帶細胞在培養(yǎng)72h后，開始貼壁，5天后貼壁細胞開始增多，形成細胞克隆，傳代培養(yǎng)，細胞逐漸純化，形態(tài)呈均一的細長梭形。流式細胞儀分析這些細胞表達CD13，CD29，CD44，CD90，CD166和MHC-Ⅰ，而不表達造血和內(nèi)皮細胞的標志物，如CD31、CD34、CD38、CD45、CD106、CD117，CD144和MHC-Ⅱ，經(jīng)多次傳代后，表面分子表達無明顯改變。在成骨細胞和成脂肪細胞誘導培養(yǎng)后，VonKossa染色和油紅O染色陽性，說明其能夠分化為骨細胞和脂肪細胞。這說明我們分離的臍帶細胞與骨髓間充質(zhì)干細胞具有相似的特性，證明了其干細胞特性，我們稱之為UCDS細胞。 在第二部分中，我們研究了在5-氮胞苷的作用下，UCDS細胞能否分化為心肌樣細胞。5-氮胞苷誘導后，細胞的形態(tài)不斷發(fā)生變化，但是沒有觀察到明顯的肌管形成，也沒有觀察到可以跳動的心肌細胞。RT-PCR檢測顯示分化后的UCDS細胞表達心肌特異性基因肌鈣蛋白T，免疫組化檢測誘導后的細胞表達心肌特異性α-肌動蛋白、肌球蛋白和肌鈣蛋白T，，表達率在50％以上。電鏡下觀察，誘導4周后，UCDS細胞有明顯的肌絲樣結(jié)構(gòu)形成，說明在5-氮胞苷的作用下，UCDS細胞能夠分化為心肌樣細胞。 第三部分的目的是研究在內(nèi)皮細胞生長因子和堿性成纖維細胞生長因子的作用下，UCDS細胞能否向內(nèi)皮細胞方向分化。在體外經(jīng)過誘導之后，細胞形態(tài)不斷發(fā)生變化，形成網(wǎng)格樣結(jié)構(gòu)。免疫熒光顯示，分化后的UCDS細胞CD31、CD34染色陽性，具有攝取DiI-Ac-LDL的功能。流式鑒定細胞的分化效率可以達到50％左右。下肢缺血動物模型也證明，UCDS細胞能夠在體內(nèi)缺血環(huán)境下分化為內(nèi)皮細胞，并且參與血管新生，改善下肢缺血狀況。我們的研究結(jié)果表明UCDS細胞是非常有應用前景的干細胞來源，為心肌細胞移植和體外構(gòu)建組織工程移植物以及移植物再血管化研究提供了新的種子細胞選擇。
[Abstract]:Cardiovascular disease is a serious threat to human health. Cell transplantation or tissue engineering graft construction in vitro will be a promising therapeutic option. Recently, stem cells can differentiate into myocardium and endothelial cells in vitro, which is of great significance for cell transplantation and construction of tissue engineering grafts. Bone marrow mesenchymal stem cells are the most studied stem cells, but with age, the number of bone marrow mesenchymal stem cells and their ability to proliferate and differentiate in vitro are significantly reduced, which requires us to find a better source of stem cells. Umbilical cord tissue is a promising alternative source of stem cells. In the first part of this study, stem cells were isolated from umbilical cord tissue by collagenase digestion. After 72 hours of culture, the newly isolated umbilical cord cells began to adhere to the wall for 5 days and then the adherent cells began to increase, forming cell clones and subculture. The cells were gradually purified, with a uniform shape of slender fusiform. Flow cytometry was used to analyze the expression of CD13, CD29, CD44, CD90, CD166 and MHC- 鈪

本文編號：1825376