本文選題：臍帶干細(xì)胞 + 分離�。� 參考：《中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2007年博士論文

【摘要】： 心血管疾病嚴(yán)重威脅人類的健康，細(xì)胞移植或體外構(gòu)建組織工程移植物將是一個(gè)很有前景的治療選擇。但組織工程移植物面臨再血管化或內(nèi)皮化的問(wèn)題，最近研究發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞在體外可以分化為心肌和內(nèi)皮細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞移植和構(gòu)建組織工程移植物有非常重要的意義。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是研究最多的干細(xì)胞，但是隨著年齡的增加，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的數(shù)量和體外增殖分化能力都明顯減弱，這需要我們?nèi)ふ腋玫母杉?xì)胞來(lái)源，臍帶組織是非常有希望的干細(xì)胞替代來(lái)源。 本研究的第一部分采用膠原酶消化法從臍帶組織中分離干細(xì)胞，新鮮分離的臍帶細(xì)胞在培養(yǎng)72h后，開(kāi)始貼壁，5天后貼壁細(xì)胞開(kāi)始增多，形成細(xì)胞克隆，傳代培養(yǎng)，細(xì)胞逐漸純化，形態(tài)呈均一的細(xì)長(zhǎng)梭形。流式細(xì)胞儀分析這些細(xì)胞表達(dá)CD13，CD29，CD44，CD90，CD166和MHC-Ⅰ，而不表達(dá)造血和內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物，如CD31、CD34、CD38、CD45、CD106、CD117，CD144和MHC-Ⅱ，經(jīng)多次傳代后，表面分子表達(dá)無(wú)明顯改變。在成骨細(xì)胞和成脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)后，VonKossa染色和油紅O染色陽(yáng)性，說(shuō)明其能夠分化為骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。這說(shuō)明我們分離的臍帶細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有相似的特性，證明了其干細(xì)胞特性，我們稱之為UCDS細(xì)胞。 在第二部分中，我們研究了在5-氮胞苷的作用下，UCDS細(xì)胞能否分化為心肌樣細(xì)胞。5-氮胞苷誘導(dǎo)后，細(xì)胞的形態(tài)不斷發(fā)生變化，但是沒(méi)有觀察到明顯的肌管形成，也沒(méi)有觀察到可以跳動(dòng)的心肌細(xì)胞。RT-PCR檢測(cè)顯示分化后的UCDS細(xì)胞表達(dá)心肌特異性基因肌鈣蛋白T，免疫組化檢測(cè)誘導(dǎo)后的細(xì)胞表達(dá)心肌特異性α-肌動(dòng)蛋白、肌球蛋白和肌鈣蛋白T，，表達(dá)率在50％以上。電鏡下觀察，誘導(dǎo)4周后，UCDS細(xì)胞有明顯的肌絲樣結(jié)構(gòu)形成，說(shuō)明在5-氮胞苷的作用下，UCDS細(xì)胞能夠分化為心肌樣細(xì)胞。 第三部分的目的是研究在內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的作用下，UCDS細(xì)胞能否向內(nèi)皮細(xì)胞方向分化。在體外經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)之后，細(xì)胞形態(tài)不斷發(fā)生變化，形成網(wǎng)格樣結(jié)構(gòu)。免疫熒光顯示，分化后的UCDS細(xì)胞CD31、CD34染色陽(yáng)性，具有攝取DiI-Ac-LDL的功能。流式鑒定細(xì)胞的分化效率可以達(dá)到50％左右。下肢缺血?jiǎng)游锬Ｐ鸵沧C明，UCDS細(xì)胞能夠在體內(nèi)缺血環(huán)境下分化為內(nèi)皮細(xì)胞，并且參與血管新生，改善下肢缺血狀況。我們的研究結(jié)果表明UCDS細(xì)胞是非常有應(yīng)用前景的干細(xì)胞來(lái)源，為心肌細(xì)胞移植和體外構(gòu)建組織工程移植物以及移植物再血管化研究提供了新的種子細(xì)胞選擇。
[Abstract]:Cardiovascular disease is a serious threat to human health. Cell transplantation or tissue engineering graft construction in vitro will be a promising therapeutic option. Recently, stem cells can differentiate into myocardium and endothelial cells in vitro, which is of great significance for cell transplantation and construction of tissue engineering grafts. Bone marrow mesenchymal stem cells are the most studied stem cells, but with age, the number of bone marrow mesenchymal stem cells and their ability to proliferate and differentiate in vitro are significantly reduced, which requires us to find a better source of stem cells. Umbilical cord tissue is a promising alternative source of stem cells. In the first part of this study, stem cells were isolated from umbilical cord tissue by collagenase digestion. After 72 hours of culture, the newly isolated umbilical cord cells began to adhere to the wall for 5 days and then the adherent cells began to increase, forming cell clones and subculture. The cells were gradually purified, with a uniform shape of slender fusiform. Flow cytometry was used to analyze the expression of CD13, CD29, CD44, CD90, CD166 and MHC- 鈪

本文編號(hào)：1825376