本文選題：大腸埃希菌 + ERIC-PCR��； 參考：《中國病原生物學雜志》2014年09期

【摘要】：目的對大腸埃希菌ERIC-PCR反應體系進行優(yōu)化。方法提取大腸埃希菌基因組DNA作為ERIC-PCR反應的模板,通過設(shè)計一個L9(34)正交試驗對Mg2+濃度、dNTPs濃度、引物濃度和Taq DNA聚合酶4種因素進行優(yōu)化。結(jié)果通過L9(34)正交試驗優(yōu)化的大腸埃希菌ERIC-PCR最佳反應體系(25μl)為:2.5μl 10×Loading buffer,Mg2+濃度2.0mmol/L,dNTPs濃度200μmol/L,引物濃度0.2μmol/L,Taq DNA聚合酶1.0U,模板DNA 40ng。應用該體系進行ERIC-PCR得到的DNA指紋圖譜條帶豐富、清晰、重復性好。結(jié)論采用正交試驗優(yōu)化的ERIC-PCR反應體系結(jié)果穩(wěn)定可靠,對于大腸埃希菌在分子水平上的分型鑒定以及分子流行病學調(diào)查具有重要意義。
[Abstract]:Objective to optimize the ERIC-PCR reaction system of Escherichia coli. Methods the genomic DNA of Escherichia coli was extracted as a template for ERIC-PCR reaction, and four factors, including Mg2 concentration, primer concentration and Taq DNA polymerase, were optimized by designing an orthogonal test. Results the optimal reaction system of Escherichia coli ERIC-PCR was optimized by L9 / 34) orthogonal test. The optimal reaction system of Escherichia coli was: 1: 2.5 渭 l 10 脳 Loading buffer Mg2 2.0 mmol / L 200 渭 mol / L, primer 0.2 渭 mol 路L ~ (-1) Taq DNA polymerase 1.0 U, template DNA 40 ng 路min ~ (-1), primer concentration 0.2 渭 mol / L ~ (-1) Taq DNA polymerase 1.0 渭 mol / L, template DNA 40 ng. The DNA fingerprints obtained by ERIC-PCR were rich, clear and reproducible. Conclusion the results of ERIC-PCR reaction system optimized by orthogonal test are stable and reliable, which is of great significance for the identification of Escherichia coli at molecular level and molecular epidemiological investigation.
【作者單位】： 青島大學基礎(chǔ)醫(yī)學院病原生物學實驗室;青島大學國家重點實驗室培育基地;
【基金】：山東省自然科學基金項目(No.ZR2012HQ005) 青島大學引進人才資助項目(No.063-06300510)
【分類號】：R378.21

【參考文獻】

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本文編號：1823493