本文選題：骨形態(tài)發(fā)生蛋白 + 非復(fù)制型腺病毒��； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】：目的 構(gòu)建含有人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4基因的非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體(?)AdE／hBMP-4并檢測目的基因的表達(dá)，以期用于骨組織工程基因治療的研究。 方法 EcoR Ⅰ雙酶切質(zhì)粒pCS2(+)／hBMP-4獲得目的基因片段，將hBMP-4基因片段首先克隆至非病毒真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)，后利用該載體上含有的酶切位點(diǎn)Kpn Ⅰ和Xba Ⅰ，再將hBMP-4基因片段定向克隆至腺病毒穿梭質(zhì)粒pShuttle-CMV，接著用電穿孔法轉(zhuǎn)化至含有骨架質(zhì)粒pAdEasy-1的E．coli BJ5183／p中進(jìn)行同源重組，脂質(zhì)體法將腺病毒重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞，，利用HEK293細(xì)胞中表達(dá)的腺病毒E1蛋白將重組體包裝成含有hBMP-4基因的完整非復(fù)制型腺病毒，病毒顆粒感染HEK293和HeLa細(xì)胞，提取總RNA和總蛋白，進(jìn)行RT-PCR和Western-blot檢測。 結(jié)果 獲得了含有目的基因的非病毒真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)／hBMP-4，經(jīng)酶切、測序構(gòu)建正確，RT-PCR和Western-blot檢測可以表達(dá)hBMP-4；構(gòu)建成功非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體(?)AdE／hBMP-4，酶切提示構(gòu)建正確，RT-PCR檢測到hBMP-4基因的轉(zhuǎn)錄，Western-blot檢測到hBMP-4蛋白表達(dá)。 結(jié)論 將目的基因hBMP-4克隆至非復(fù)制型腺病毒表達(dá)載體中，為進(jìn)一步研究其在骨缺損基因治療中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct a non-replicating adenovirus expression vector containing human bone morphogenetic protein-4 gene and detect the expression of the target gene in order to study the gene therapy of bone tissue engineering. Methods the target gene fragment of EcoR 鈪

本文編號(hào)：1808165