發(fā)布時(shí)間：2018-04-21 08:50

  本文選題：人巨細(xì)胞病毒 + 臨床病毒株��； 參考：《暨南大學(xué)》2006年博士論文

【摘要】：目的：1．分離廣州地區(qū)圍產(chǎn)新生兒感染的人巨細(xì)胞病毒(HumanCytomegalovirus，HCMV)臨床病毒株；2．研究這些低傳代HCMV臨床病毒株基因組中的特有基因UL136～UL148的結(jié)構(gòu)，分析其結(jié)構(gòu)多態(tài)性與HCMV先天性感染致病的關(guān)系；3．研究HCMV臨床毒株特有基因的表達(dá)情況，探討這些基因編碼產(chǎn)物的功能，揭示它們?cè)谙忍煨訦CMV感染的致病機(jī)制中可能的作用。試圖通過(guò)這些研究為臨床低傳代HCMV臨床致病機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ)。 方法：1．從廣州地區(qū)先天性感染HCMV的新生兒尿液中分離野生型HCMV病毒，獲取病毒DNA和RNA；2．根據(jù)GenBank公布的HCMV低傳代毒株Toledo的UL136-UL148等13個(gè)基因全序列及有關(guān)文獻(xiàn)，應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增這些特有基因片段；3．應(yīng)用基因克隆技術(shù)構(gòu)建這些特有基因的重組質(zhì)粒；4．對(duì)重組體進(jìn)行測(cè)序；5．應(yīng)用生物信息學(xué)方法分析這些基因結(jié)構(gòu)、及其編碼蛋白質(zhì)的多態(tài)性；6．應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)上述基因mRNA的表達(dá)情況；7．并分析其編碼產(chǎn)物的基本性質(zhì)和特征。 結(jié)果：1．成功分離獲得4株HCMV臨床低傳代病毒株：HCMV D3、D2、D52、C30；2．以HCMV D3臨床毒株為研究主體，應(yīng)用PCR技術(shù)成功擴(kuò)增出UL136～UL148特有區(qū)域的全部13個(gè)基因，同時(shí)擴(kuò)增其他臨床毒株的相應(yīng)基因，，獲得上述毒株的13個(gè)特有基因的總共32個(gè)全基因序列；3．克隆測(cè)序，序列呈報(bào)GenBank，收錄序列號(hào)為：DQ180354～DQ180391；4．對(duì)臨床毒株的這些基因及其編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行同源性比較分析，發(fā)現(xiàn)大部分基因較為保守，具有相對(duì)穩(wěn)定的序列，同時(shí)又具有較為豐富的多態(tài)性；5．從C30野生毒株中能檢測(cè)到UL137、UL142、UL144、UL145和UL148等5個(gè)基因存在mRNA水平的表達(dá)。 結(jié)論：1．廣州地區(qū)圍產(chǎn)新生兒感染HCMV的臨床毒株基因組中，存在著實(shí)驗(yàn)病毒株所缺失的UL136～UL148等13個(gè)獨(dú)特基因結(jié)構(gòu)，并且具有較為豐富的多態(tài)性。2．本研究初步證實(shí)了其中UL137、UL142、UL144、UL145、UL148等5
[Abstract]:Purpose 1. Human cytomegalovirus (HCMV) clinical virus strain of human cytomegalovirus (HCMV) was isolated from perinatal neonates in Guangzhou area. To study the structure of the unique gene UL136~UL148 in the genome of these low passage HCMV clinical virus strains and to analyze the relationship between its structural polymorphism and the pathogenesis of congenital HCMV infection. To study the expression of genes specific to clinical strains of HCMV, to explore the function of these gene coding products, and to reveal their possible role in the pathogenesis of congenital HCMV infection. Through these studies, we try to lay a foundation for the study of clinical pathogenesis of low passage HCMV. Method 1: 1. Wild-type HCMV virus was isolated from urine of neonates with congenital HCMV infection in Guangzhou area, and virus DNA and RNA2 were obtained. According to the whole sequence of 13 genes of HCMV low passage strain Toledo and related literature published by GenBank, the specific gene fragment was amplified by PCR technique. The recombinant plasmids of these unique genes were constructed by gene cloning technique. The recombinant was sequenced. Bioinformatics was used to analyze the structure of these genes and the polymorphism of their encoded proteins. RT-PCR technique was used to detect the expression of mRNA. The basic properties and characteristics of the coded products are analyzed. The result is 1: 1. Four HCMV clinical low passage virus strains were successfully isolated and obtained. Using HCMV D3 clinical strain as the main research subject, all 13 genes in the specific region of UL136~UL148 were successfully amplified by PCR technique, and the corresponding genes of other clinical strains were amplified simultaneously. A total of 32 complete gene sequences of 13 unique genes of the above mentioned strains were obtained. Cloning and sequencing, the sequence was reported to GenBank.The serial number was:: DQ180354 / DQ180391. The homology analysis of these genes and their encoded proteins in clinical strains showed that most of the genes were conserved, had relatively stable sequences, and had abundant polymorphisms at the same time. The expression of mRNA was detected in 5 genes of UL137, UL142U144U144U145 and UL148 from C30 wild strain. Conclusion 1. In the clinical genome of perinatal neonates infected with HCMV, there are 13 unique gene structures, such as UL136~UL148, which are missing from the experimental virus strains, and there are abundant polymorphisms. 2. This study has preliminarily confirmed that UL137FU, UL142FU, UL144FU, UL145U, et al.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R373

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本文編號(hào)：1781732