本文選題：單純皰疹病毒 + 實(shí)時(shí)熒光定量PCR��； 參考：《中國(guó)輸血雜志》2014年06期

【摘要】：目的建立基于SYBR Green和Taqman探針的2種實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)方法,用于檢測(cè)人單純皰疹病毒(HSV)并評(píng)估2種方法檢測(cè)血漿中HSV的有效性。方法根據(jù)GenBank中HSV的UL30基因保守序列設(shè)計(jì)引物和探針,并構(gòu)建含有UL30基因保守序列的重組質(zhì)粒,以該重組質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)品,通過(guò)對(duì)144(人)份獻(xiàn)漿者HSV的檢測(cè),建立并評(píng)估基于SYBR Green和Taqman探針的2種qPCR檢測(cè)方法。結(jié)果所建立的2種qPCR方法對(duì)于HSV均具有高度特異性,對(duì)HBV和梅毒無(wú)交叉反應(yīng);檢測(cè)靈敏度高,檢測(cè)下限均為5×101cp/反應(yīng)體系,并都有較好的批間和批內(nèi)重復(fù)性;基于SYBR Green的qPCR檢測(cè)方法得到的熔解曲線峰單一。應(yīng)用該2種qPCR方法對(duì)獻(xiàn)漿人群血漿標(biāo)本HSV檢測(cè):檢出率均為2.08%(3/144),二者都能用于HSV載量的測(cè)定。結(jié)論成功建立了2種qPCR反應(yīng)體系,二者對(duì)HSV的檢測(cè)特異性強(qiáng)、靈敏度高、均一性好,可應(yīng)用于獻(xiàn)血(漿)者血液檢測(cè)。
[Abstract]:Objective to establish two real-time fluorescent quantitative PCR methods based on SYBR Green and Taqman probes for the detection of human herpes simplex virus (HSV) and to evaluate the effectiveness of these two methods in detecting HSV in plasma.Methods Primer and probe were designed according to the conserved sequence of UL30 gene of HSV in GenBank, and the recombinant plasmid containing conserved sequence of UL30 gene was constructed. Using the recombinant plasmid as standard, the HSV of 144 (human) donors was detected.Two qPCR detection methods based on SYBR Green and Taqman probe were established and evaluated.Results the two qPCR methods were highly specific to HSV and had no cross reaction with HBV and syphilis, the detection sensitivity was high, the detection limit was 5 脳 101cp/ reaction system, and both had good reproducibility between batches and within batches.The melting curve peak obtained by qPCR detection method based on SYBR Green is single.The two qPCR methods were used to detect HSV in plasma samples: the detectable rate was 2.08 / 144%, both of which could be used for the determination of HSV load.Conclusion two kinds of qPCR reaction systems were successfully established. The two methods have the advantages of high specificity, high sensitivity and good homogeneity for detection of HSV, and can be used for blood detection in blood donors.
【作者單位】： 四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;成都生物制品研究所有限責(zé)任公司;
【分類號(hào)】：R373.11;R3416

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本文編號(hào)：1767259