本文選題：黃熱病病毒 + 黃熱疫苗　； 參考：《北京生物制品研究所》2007年碩士論文

【摘要】： 黃熱疫苗是高度減毒的活病毒疫苗，其生產(chǎn)基質(zhì)是7日齡全雞胚，在世界范圍內(nèi)已經(jīng)安全使用了50多年。本實驗將17D株黃熱疫苗病毒在雞胚成纖維細(xì)胞中連續(xù)傳代，通過對傳代病毒的遺傳穩(wěn)定性研究，探討將傳統(tǒng)用于黃熱疫苗生產(chǎn)的全雞胚改換為雞胚成纖維細(xì)胞后，是否會對疫苗的遺傳穩(wěn)定性產(chǎn)生影響，從而為使用雞胚成纖維細(xì)胞作為黃熱疫苗生產(chǎn)基質(zhì)的科研路線提供一些依據(jù)。 在本實驗中選擇黃熱疫苗國際標(biāo)準(zhǔn)品99／616(NCBI編號)和我國黃熱疫苗工作毒種2006(54)0239(天壇生物編號)作為實驗用傳代毒種，兩者都是17D疫苗株，其中99／616分離自17D-204株。將兩株毒種分別在雞胚成纖維細(xì)胞中適應(yīng)性傳代，各自傳10代，記作“99／616-CEF傳代病毒”和“YFVBJ-CEF傳代病毒”。選取99／616-CEF傳代病毒和YFVBJ-CEF傳代病毒的1、3、6、9代病毒，對其結(jié)構(gòu)基因片斷C、M、E的核苷酸序列進(jìn)行測定。此外，對我國商品用黃熱疫苗的核苷酸序列也進(jìn)行測定，該疫苗的工作毒種是2006(54)0239，培養(yǎng)基質(zhì)為7日齡活雞胚。對測序結(jié)果的數(shù)據(jù)分析包括三部分，一：分析99／616-CEF傳代病毒的遺傳穩(wěn)定性。將99／616-EEF傳代病毒的測序結(jié)果與NCBI GENEBANK公布的17D-204株黃熱疫苗的核苷酸序列進(jìn)行比較。二：分析YFVBJ-CEF傳代病毒的遺傳穩(wěn)定性。將YFVBJ-CEF傳代病毒與我國商品用黃熱疫苗的測序結(jié)果進(jìn)行比較。三：分析我國黃熱疫苗毒種的歷史背景。將我國商品用黃熱疫苗的測序結(jié)果與NCBI GENEBANK公布的17D-204、17DD株黃熱疫苗的核苷酸序列分別進(jìn)行比較。 通過實驗結(jié)果分析推斷：黃熱疫苗病毒經(jīng)過在雞胚成纖維細(xì)胞中傳代后，，其遺傳物質(zhì)會發(fā)生適應(yīng)性改變。99／616-CEF傳代病毒和YFVBJ-CEF傳代病毒在結(jié)構(gòu)基因片斷C上均有較活躍的核苷酸位點；結(jié)構(gòu)基因片斷M、E在99／616-CEF傳代病毒中表現(xiàn)比較活躍，而在BJYFV-CEF傳代病毒中沒有發(fā)生改變。我國的黃熱疫苗毒種來自于黃熱病毒減毒疫苗株17D株，在基因水平上與17D-204、17DD株有不同之處，可能是17D-204疫苗株的另一旁支。
[Abstract]:Yellow fever vaccine is a highly attenuated live virus vaccine. Its production substrate is 7 days old whole chicken embryo. It has been used safely in the world for more than 50 years.In this experiment, the 17D yellow fever vaccine virus was continuously subcultured in chicken embryo fibroblasts. By studying the genetic stability of the virus, the whole chicken embryo used in yellow fever vaccine production was changed into chicken embryo fibroblast.Whether it will affect the genetic stability of the vaccine will provide some basis for the research route of using chicken embryo fibroblasts as the substrate for producing yellow fever vaccine.In this experiment, yellow fever vaccine international standard 99/616(NCBI number) and Chinese yellow fever vaccine working strain 2006 ~ 54,0239 (Temple of Heaven biological code) were selected as experimental subculture virus. Both of them were 17D vaccine strains, of which 99 / 616 were isolated from 17D-204 strain.The two strains were subcultured adaptively in chicken embryo fibroblasts for 10 generations, respectively, and were recorded as "99/616-CEF subculture virus" and "YFVBJ-CEF subculture virus".The nucleotide sequence of the structural gene fragment of 99/616-CEF virus and YFVBJ-CEF virus was determined.In addition, the nucleotide sequence of yellow fever vaccine for commercial use in China was also determined. The working strain of the vaccine was 2006A54,0239, and the culture medium was 7-day-old live chicken embryo.The data analysis of sequencing results consists of three parts: first, the genetic stability of 99/616-CEF subculture virus is analyzed.The sequencing results of 99/616-EEF subculture virus were compared with the nucleotide sequence of yellow fever vaccine of 17D-204 strain published by NCBI GENEBANK.Second, the genetic stability of YFVBJ-CEF subculture virus was analyzed.The sequencing results of YFVBJ-CEF subculture virus and commercial yellow fever vaccine in China were compared.The third is to analyze the historical background of yellow fever vaccine in China.The sequencing results of commercial yellow fever vaccine in China were compared with the nucleotide sequence of 17D-204DD-17DD strain yellow fever vaccine published by NCBI GENEBANK.The results showed that the genetic material of yellow fever vaccine virus could change adaptively after it was subcultured in chicken embryo fibroblasts. Both of them had active nucleotide sites on structural gene fragment C.The structural gene fragment MNE was active in the 99/616-CEF passaged virus, but not changed in the BJYFV-CEF subculture virus.The yellow fever vaccine strains in China come from the attenuated yellow fever virus strain 17D, which is different from 17D-204A17DD strain in gene level and may be another branch of 17D-204 vaccine strain.
【學(xué)位授予單位】：北京生物制品研究所
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R392

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本文編號：1761816