本文選題：貝氏柯克斯體 + Q熱�。� 參考：《中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2006年博士論文

【摘要】：貝氏柯克斯體是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生的革蘭陰氏性小球桿菌，為Q熱的病原體。單核—巨噬細(xì)胞是貝氏柯克斯體關(guān)鍵宿主細(xì)胞。本研究擬通過細(xì)胞生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)等方法研究貝氏柯克斯體與宿主細(xì)胞(單核細(xì)胞)的相互作用，進(jìn)一步探討貝氏柯克斯體的致病機(jī)理，為尋找抗貝氏柯克斯體感染新型藥物靶標(biāo)、設(shè)計新型疫苗提供理論依據(jù)。 本研究對貝氏柯克斯體進(jìn)入單核細(xì)胞和在單核細(xì)胞內(nèi)生長的規(guī)律進(jìn)行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，，人單核細(xì)胞(THP-1)對活貝氏柯克斯體的吞噬效率則顯著低于其對γ射線滅活貝氏柯克斯體的吞噬。單核細(xì)胞內(nèi)的活貝氏柯克斯體從第4天開始，數(shù)量逐漸增加；而滅活貝氏柯克斯體與單核細(xì)胞作用1天后，細(xì)胞內(nèi)貝氏柯克斯體的量迅速減少，第5天后細(xì)胞內(nèi)貝氏柯克斯體幾乎被完全清除。 在此基礎(chǔ)上，本研究又對吞噬毒力株貝氏柯克斯體和未吞噬的單核細(xì)胞進(jìn)行了比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析。對吞噬及未吞噬貝氏柯克斯體4小時后的單核細(xì)胞總蛋白樣品雙向電泳結(jié)果使用軟件分析，總共發(fā)現(xiàn)158個差異蛋白，通過質(zhì)譜鑒定一共確定了97個差異蛋白，多數(shù)蛋白表達(dá)為上調(diào)。對差異蛋白的功能進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)它們分別參與細(xì)胞的能量代謝、應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞骨架運(yùn)動、蛋白質(zhì)和核酸合成代謝等。這些蛋白在單核細(xì)胞內(nèi)的作用多數(shù)有利于貝氏柯克斯體在單核細(xì)胞內(nèi)的生長繁殖和感染的建立。進(jìn)一步研究這些差異蛋白在貝氏柯克斯體感染單核細(xì)胞中所起的作用，將為抗Q熱藥物、疫苗的的研制提供新的思路。 本研究嘗試建立了在雞胚中培養(yǎng)至對數(shù)生長期的貝氏柯克斯體全菌蛋白參考圖譜。并使用不同感染時期的小鼠血清，對貝氏柯克斯體全菌蛋白雙向電泳分離蛋白進(jìn)行了免疫印跡分析，用貝氏柯克斯體感染5天的血清，僅檢測到2個蛋白點(diǎn)，用感染10天的血清檢測到8個蛋白點(diǎn)，感染20天的血清檢測到18個蛋白點(diǎn)，感染30天的血清共計檢測到94個蛋白點(diǎn)，但是僅13個免疫反應(yīng)蛋白被質(zhì)譜分析鑒定。通過免疫蛋白質(zhì)組學(xué)分析免疫反應(yīng)蛋白的動態(tài)變化，可能發(fā)現(xiàn)新的免疫反應(yīng)蛋白，為貝氏柯克斯體感染的早期診斷以及疫苗的研究提供新的靶標(biāo)。
[Abstract]:Coxella Bayersoni is a specific intracellular parasite of Gram-Bacillus vulgaris, which is the pathogen of Q fever.Mononuclear-macrophages are the key host cells of Coxella bassii.In this study, we studied the interaction between Coxella bassii and host cells (monocytes) by means of cell biology and proteomics, and further explored the pathogenicity of Coxella bassii.In order to find a new drug target against Coxella bassii infection and design a new vaccine to provide theoretical basis.In this study, we studied the regularity of the entry and growth of Coxella Baysoni into monocytes.The results showed that the phagocytic efficiency of human monocyte THP-1 was significantly lower than that of 緯 -ray inactivated Coxella flexneri.The number of living Coxella in monocytes increased gradually from the 4th day, and the amount of Coxella Baysoni decreased rapidly after one day of inactivation of Coxella beersoni with monocytes.After 5 days, the intracellular Coxella bassii was almost completely removed.On this basis, we compared the proteomic analysis of the phagocytic virulence strain of Coxella Baysoni and the unphagocytic monocytes.A total of 158 differentially expressed proteins were found by using software to analyze the results of two-dimensional electrophoresis of total monocyte protein samples after 4 hours of phagocytosis and non-phagocytosis. 97 differential proteins were identified by mass spectrometry.Most proteins were up-regulated.By analyzing the function of differential proteins, it was found that they were involved in energy metabolism, stress response, cytoskeleton movement, protein and nucleic acid biosynthesis, etc.The effect of these proteins in monocytes is beneficial to the growth, reproduction and infection of Coxella bassii in monocytes.Further study on the role of these differential proteins in the infection of monocytes with Coxella bassii will provide a new idea for the development of anti-Q fever drugs and vaccines.In this study, a reference map of the whole bacterial protein of Coxella Baysoni was established from chicken embryo to logarithmic growth stage.Using mouse serum of different infection period, the two dimensional electrophoresis of the isolated proteins of Coxella beersoni was analyzed by Western blotting. Only two protein spots were detected in the sera infected with Coxella bassii for 5 days.Eight protein spots were detected in the serum of 10 days of infection, 18 spots in the serum of 20 days of infection, 94 spots in the serum of 30 days of infection, but only 13 immunoreactive proteins were identified by mass spectrometry.By analyzing the dynamic changes of immunoreactive proteins, new immunoreactive proteins may be found, which may provide a new target for the early diagnosis of Coxella bassii infection and the study of vaccines.
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R378

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本文編號：1743691