本文選題：基因芯片　切入點：中分辨度　出處：《天津醫(yī)科大學》2007年碩士論文

【摘要】： 目的制備HLA寡核苷酸分型芯片，并應用基因芯片篩查糖尿病腎病遺傳易感性內(nèi)容HLA分型在骨髓干細胞庫的建立、疾病易感性機理研究、組織器官移植等方面具有重大應用價值。由于HLA基因結構的高度多態(tài)性，對HLA抗原分型存在很大困難。目前對于HLA-Ⅰ、Ⅱ類抗原的分型，臨床上常常采用血清學方法，但由于該方法存在著廣泛的交叉反應和難以找到理想的單抗，常常出現(xiàn)技術上的困難和分型判斷誤差。PCR-SSP方法也有采用，國內(nèi)外的分型試劑盒大都采用這種方法，但是因需要通過大量的電泳來確定分型結果，其臨床大量樣品應用也受到了限制。自20世紀90年代開始，基因芯片技術在高通量生物檢測領域得到迅速發(fā)展，日臻成熟。作為斑點雜交技術的延伸，基因芯片技術以其快速，高通量，大信息量檢測等特點，，在HLA分型方面有很大優(yōu)勢，自基因水平對HLA-Ⅰ、Ⅱ類抗原分型無論在準確性及方便性上都具有重要意義。我們設計了213種寡合苷酸探針，制備了基因芯片，建立了HLA寡核苷酸分型芯片這一檢測平臺，并應用該分型芯片進行糖尿病腎病的遺傳易感性研究。方法在本實驗中我們用三甲氧基硅烷建立了優(yōu)化環(huán)氧片基的制備方法。并依據(jù)第十三屆國際組織相容性工作會議報告及相關文獻，同時考慮遺傳的連鎖不平衡，及強脊炎，幼年型糖尿病等與HLA密切相關的遺傳病等因素，選擇了中國北方漢族人群基因頻率較高的等位基因，根據(jù)HLA-A，HLA-B，HLA-DR，HLA-DQB，HLA-DQA不同基因亞型的獨特序列，完成了探針的設計與篩選，最后設計了213條探針，可完成中分辨度分型。在這一平臺的基礎上，進行一些應用基因芯片篩查糖尿病腎病遺傳易感性的相關研究工作。結果所有樣本的HLA-Ⅰ、Ⅱ類抗原基因分型均獲成功�？煞直娉�598個Ⅰ類抗原基因型，511個Ⅱ類抗原基因型，可撿出Ⅰ類抗原基因位點57個，Ⅱ類抗原基因位點30個。并證實了B41、DR4等基因與糖尿病腎病的相關關系。結論這些探針完全可以完成中分辨率的組織配型，較臨床現(xiàn)在常用的進口試劑盒有更方便，更省時，更精確而且可同時完成一二類基因的配型。該種芯片檢測方法不但能完成配型的需要，而且可以用于與HLA密切相關的一些自身免疫性疾病的遺傳因素的分析。
[Abstract]:Objective to prepare HLA oligonucleotide typing microarray and to screen genetic susceptibility to diabetic nephropathy by gene chip. HLA typing is of great value in the establishment of bone marrow stem cell bank, the study of disease susceptibility mechanism, and the transplantation of tissues and organs.Because of the high polymorphism of HLA gene structure, it is very difficult to type HLA antigen.At present, serological methods are often used in the typing of HLA- 鈪

本文編號：1702618