本文選題：基因芯片　切入點(diǎn)：中分辨度　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 目的制備HLA寡核苷酸分型芯片，并應(yīng)用基因芯片篩查糖尿病腎病遺傳易感性內(nèi)容HLA分型在骨髓干細(xì)胞庫的建立、疾病易感性機(jī)理研究、組織器官移植等方面具有重大應(yīng)用價(jià)值。由于HLA基因結(jié)構(gòu)的高度多態(tài)性，對HLA抗原分型存在很大困難。目前對于HLA-Ⅰ、Ⅱ類抗原的分型，臨床上常常采用血清學(xué)方法，但由于該方法存在著廣泛的交叉反應(yīng)和難以找到理想的單抗，常常出現(xiàn)技術(shù)上的困難和分型判斷誤差。PCR-SSP方法也有采用，國內(nèi)外的分型試劑盒大都采用這種方法，但是因需要通過大量的電泳來確定分型結(jié)果，其臨床大量樣品應(yīng)用也受到了限制。自20世紀(jì)90年代開始，基因芯片技術(shù)在高通量生物檢測領(lǐng)域得到迅速發(fā)展，日臻成熟。作為斑點(diǎn)雜交技術(shù)的延伸，基因芯片技術(shù)以其快速，高通量，大信息量檢測等特點(diǎn)，，在HLA分型方面有很大優(yōu)勢，自基因水平對HLA-Ⅰ、Ⅱ類抗原分型無論在準(zhǔn)確性及方便性上都具有重要意義。我們設(shè)計(jì)了213種寡合苷酸探針，制備了基因芯片，建立了HLA寡核苷酸分型芯片這一檢測平臺，并應(yīng)用該分型芯片進(jìn)行糖尿病腎病的遺傳易感性研究。方法在本實(shí)驗(yàn)中我們用三甲氧基硅烷建立了優(yōu)化環(huán)氧片基的制備方法。并依據(jù)第十三屆國際組織相容性工作會議報(bào)告及相關(guān)文獻(xiàn)，同時考慮遺傳的連鎖不平衡，及強(qiáng)脊炎，幼年型糖尿病等與HLA密切相關(guān)的遺傳病等因素，選擇了中國北方漢族人群基因頻率較高的等位基因，根據(jù)HLA-A，HLA-B，HLA-DR，HLA-DQB，HLA-DQA不同基因亞型的獨(dú)特序列，完成了探針的設(shè)計(jì)與篩選，最后設(shè)計(jì)了213條探針，可完成中分辨度分型。在這一平臺的基礎(chǔ)上，進(jìn)行一些應(yīng)用基因芯片篩查糖尿病腎病遺傳易感性的相關(guān)研究工作。結(jié)果所有樣本的HLA-Ⅰ、Ⅱ類抗原基因分型均獲成功。可分辨出598個Ⅰ類抗原基因型，511個Ⅱ類抗原基因型，可撿出Ⅰ類抗原基因位點(diǎn)57個，Ⅱ類抗原基因位點(diǎn)30個。并證實(shí)了B41、DR4等基因與糖尿病腎病的相關(guān)關(guān)系。結(jié)論這些探針完全可以完成中分辨率的組織配型，較臨床現(xiàn)在常用的進(jìn)口試劑盒有更方便，更省時，更精確而且可同時完成一二類基因的配型。該種芯片檢測方法不但能完成配型的需要，而且可以用于與HLA密切相關(guān)的一些自身免疫性疾病的遺傳因素的分析。
[Abstract]:Objective to prepare HLA oligonucleotide typing microarray and to screen genetic susceptibility to diabetic nephropathy by gene chip. HLA typing is of great value in the establishment of bone marrow stem cell bank, the study of disease susceptibility mechanism, and the transplantation of tissues and organs.Because of the high polymorphism of HLA gene structure, it is very difficult to type HLA antigen.At present, serological methods are often used in the typing of HLA- 鈪

本文編號：1702618