本文選題：氣道　切入點(diǎn)：粘蛋白　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2006年博士論文

【摘要】： 目的: 氣道急性和慢性炎癥過程中粘液及粘蛋白高分泌,糖基化程度也顯著增加。唾液酸作為主要的末端糖基之一,也是多種細(xì)菌可結(jié)合的糖受體,其增多與感染嚴(yán)重程度密切相關(guān)。而COPD等氣道慢性炎癥還存在著分泌細(xì)胞增生肥大等可能易于發(fā)生高分泌及高度唾液酸化的病理學(xué)基礎(chǔ)。這些改變的意義值得深入研究。本課題擬:(1)比較COPD與肺炎患者氣道粘蛋白大分子末端唾液酸化的差異;(2)體外干預(yù)其末端唾液酸,觀察對(duì)粘蛋白-銅綠假單胞菌相互作用的影響及兩組標(biāo)本相應(yīng)變化的異同;(3)比較無明顯感染的COPD和肺功能正常的對(duì)照組患者支氣管粘膜中常見唾液酸轉(zhuǎn)移酶mRNA表達(dá)水平的差異性;(4)體內(nèi)應(yīng)用相關(guān)干預(yù)因素,觀察對(duì)鹽酸致傷大鼠氣管內(nèi)接種細(xì)菌的影響。旨在探討糖類抗細(xì)菌粘附劑的抗感染作用效果及機(jī)制,為進(jìn)一步的藥物研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: 1、收集24例COPD和無COPD及其他慢性呼吸系統(tǒng)疾病的肺炎患者(以下分別簡(jiǎn)稱COPD組和肺炎組)氣管插管或切開后的氣道吸引物,用分次離心和瓊脂糖CL-2B凝膠層析的方法分離純化粘蛋白大分子;瓊脂糖凝膠電泳及免疫印跡驗(yàn)證分離效果,試劑盒測(cè)定總唾液酸含量,凝集素ELLA法分別比較唾液酸α2,3-和α2,6-結(jié)構(gòu)含量; 2、粘蛋白樣品包被在硅化膜片上,分別用弱堿+硼氫化鈉做β-消去、特異性植物凝集素Maackia amurensis agglutinin(MAA)和Sambucus nigra agglutinin(SNA)、α2,3-特異性唾液酸酶和非特異性唾液酸酶處理,然后接種銅綠假單胞菌,或者是唾液酸雙糖NeuAcα2-3Gal和NeuAcα2-6Gal分別與細(xì)菌混合接種,30min后解離細(xì)菌,定量培養(yǎng)以測(cè)定對(duì)細(xì)菌粘附的抑制作用;LB液體培養(yǎng)基中分別加入唾液酸雙糖、特異性凝集素,以及α2,3-特異性唾液酸酶和非特異性唾液酸酶,混入菌液后加到粘蛋白包被的膜片上,7d后掃描電鏡判斷細(xì)菌生物被膜是否形成,解離細(xì)菌、定量培養(yǎng)測(cè)定膜片上的活菌數(shù),以分析各種因素的抑制作用;
[Abstract]:Objective:Mucin and mucin are highly secreted and glycosylation is significantly increased during acute and chronic airway inflammation.Sialic acid, as one of the main terminal glycosyl groups, is also the binding sugar receptor of many bacteria. The increase of sialic acid is closely related to the severity of infection.However, chronic airway inflammation such as COPD also has the pathological basis of secretory cell proliferation and hypertrophy, which may be prone to hypersecretion and high saliva acidification.The significance of these changes deserves further study.To compare the difference of salivary acidification between COPD and pneumonia patients with airway mucin macromolecule terminal sialic acid in vitro.Observation of the effect on the interaction between mucin and Pseudomonas aeruginosa and the difference of the corresponding changes between the two groups) mRNA table of sialic acid transferase in bronchial mucosa of patients without obvious infection and normal pulmonary function(4) use of relevant intervention factors in vivo,To observe the effect of bacteria inoculation in trachea of rats injured by hydrochloric acid.The aim of this study was to investigate the anti-infective effect and mechanism of carbohydrate anti-bacterial adhesives and to provide experimental evidence for further drug development.Methods:1. Tracheal intubation and tracheotomy were collected from 24 patients with COPD and pneumonia without COPD and other chronic respiratory diseases (COPD group and pneumonia group respectively).The macromolecules of mucin were separated and purified by fractionation centrifugation and agarose CL-2B gel chromatography, the separation effect was verified by agarose gel electrophoresis and Western blotting, and the total sialic acid content was determined by kit.Lectin ELLA method was used to compare the content of sialic acid 偽 _ 2O _ 3- and 偽 _ 2O _ 6-, respectively.2. The mucin samples were coated on the silicide membrane and treated with weak alkali sodium borohydride as 尾 -elimination, specific phytoagglutinin Maackia amurensis agglutininine MAA) and Sambucus nigra agglutinine SNAA, 偽 _ 2N _ 3-specific sialidase and nonspecific sialidase respectively, and then inoculated with Pseudomonas aeruginosa.Or sialic acid disaccharide NeuAc 偽 2-3Gal and NeuAc 偽 2-6Gal were inoculated with bacteria for 30 minutes, then the bacteria were dissociated. The inhibitory effect of sialic acid disaccharide 2-3Gal and NeuAc 偽 2-6Gal on bacterial adhesion was determined by quantitative culture. The sialic acid disaccharide and specific lectin were added into LB liquid medium respectively.And 偽 _ 2o _ 3-specific sialidase and non-specific sialidase were added to the membrane coated with mucin for 7 days, then the bacterial biofilm was formed, the bacteria were dissociated, and the number of live bacteria on the membrane was determined by quantitative culture.To analyze the inhibitory effects of various factors;
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1698807