本文選題：HIV-1　切入點：MA4-CA　出處：《山東省醫(yī)學科學院》2006年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 自1981年美國發(fā)現(xiàn)世界首例艾滋病患者,至今已死亡2000多萬人,僅2003年新感染人數(shù)就有500萬。目前全世界大約已有5800萬人被感染,大約一半為15至24歲的青壯年。我國艾滋病病毒感染者迅猛增長,現(xiàn)已有84萬人被感染HIV病毒,已經(jīng)成為我國當前突出的衛(wèi)生問題,目前還沒有一種HIV疫苗問世,如何高效而迅捷的生產(chǎn)HIV疫苗成為關(guān)系人類生命健康的重大問題。應(yīng)用轉(zhuǎn)基因植物表達HIV疫苗,有其簡潔可操作性優(yōu)勢。 HIV的殼體蛋白(CA)為病毒核心結(jié)構(gòu)的主要蛋白,在病毒粒子中含量豐富,在HIV病毒的組裝和成熟過程中起著至關(guān)重要的作用,在HIV的不同亞型間高度保守。野生型的CA以圓柱狀顆粒存在,與4個HIV基質(zhì)蛋白(MA)的氨基酸殘基結(jié)合就能使CA的形狀由圓柱狀轉(zhuǎn)至球狀,進而增強CA的免疫原性。本研究利用有助于CA形成病毒樣顆粒(VLP)結(jié)構(gòu)的MA的最后四個氨基酸殘基,與CA融合表達,形成的球狀顆粒能夠增強CA的免疫原性。 枸杞與煙草同屬于茄科植物,植物細胞易于遺傳轉(zhuǎn)化,安全性性高,利用其再生成植株的形成可進行目的基因的表達。植物細胞作為真核細胞表達體系,可對其表達產(chǎn)物進行糖基化、磷酸化等翻譯后加工修飾和裝配,從而有利于提高HIV CA疫苗的免疫原性。有報道利用轉(zhuǎn)基因煙草表達的HIV-1的P24蛋白能保持較好的免疫原性。而枸杞作為一種寶貴的中藥材,則富含多種對身體有益的成分;而其作為常年生植物其遺傳性狀更加穩(wěn)定,所攜帶基因不易丟失。 在沒有相應(yīng)的HIV疫苗問世以前,應(yīng)用植物表達系統(tǒng)選擇性大量安全地表達HIV抗原多肽及眾多重組蛋白,研究它們的作用機理及其免疫活性,應(yīng)對HIV病毒的高度變異性,以制備安全高效的HIV疫苗。我實驗室與美國Utah大學的Dr. W.I. Sundquist, Professor合作將影響CA形成球狀VLP結(jié)構(gòu)的MA的四個核苷酸序列與CA融合形成MA4-CA,然后將源于水稻的一個富含甘氨酸序列的信號肽(GRP)連接在MA4-CA融合基因的3'端,從而使枸杞中表達的CA疫苗被引導進入根細胞間隙,并從根系不斷地分泌到培養(yǎng)液中,由此產(chǎn)生出高純度的CA疫苗。并在此基礎(chǔ)上.進一步明確植物組織表達的CA重組疫苗的免疫原性。為利用轉(zhuǎn)基因枸杞表達成本低廉,更為安全有效的HIV重組疫苗提供依據(jù)。 研究目的: 利用本實驗室構(gòu)建好的分泌型植物表達載體,通過根癌農(nóng)桿菌對枸杞進行遺傳轉(zhuǎn)化,篩選陽性克隆,從基因水平及蛋白水平鑒定轉(zhuǎn)基因枸杞。應(yīng)用所提取轉(zhuǎn)基因枸杞蛋白免疫BALB/c小鼠,進行其免疫原性研究。以期應(yīng)用轉(zhuǎn)基因枸杞表
[Abstract]:More than 20 million people have died since 1981, when the world's first AIDS patient was found in the United States, with 5 million new infections in 2003 alone. So far, about 58 million people have been infected in the world. About half of them are young adults aged 15 to 24. The number of HIV-infected people in China has increased rapidly, and 840000 people have been infected with HIV virus, which has become a prominent health problem in our country, and no HIV vaccine has yet been introduced. How to produce HIV vaccine efficiently and quickly has become a major problem related to human life and health. The application of transgenic plants to express HIV vaccine has the advantages of simplicity and maneuverability. The shell protein of HIV is the main protein of the core structure of the virus. It is rich in virus particles and plays an important role in the assembly and maturation of HIV virus. The wild type CA exists as a cylindrical particle and binds to the amino acid residues of four HIV matrix proteins, which can change the shape of CA from a cylindrical to a spherical one. In order to enhance the immunogenicity of CA, the last four amino acid residues of MA, which is helpful for CA to form virus like VLPstructures, were fused with CA, and the immunogenicity of CA was enhanced by spherical particles. Both Lycium barbarum and tobacco belong to the family Solanaceae. The plant cells are easy to genetic transformation and high safety. The plant cells can be used as eukaryotic expression system to express the target gene. The expressed product can be modified and assembled by glycosylation, phosphorylation and other post-translational processing. It is reported that the P24 protein of HIV-1 expressed by transgenic tobacco can maintain good immunogenicity. As a valuable Chinese herbal medicine, Lycium barbarum is rich in many beneficial components. As perennial plants, their genetic traits are more stable and the genes they carry are not easily lost. In the absence of corresponding HIV vaccine, the plant expression system was used to selectively and safely express HIV antigenic peptides and many recombinant proteins in order to study their mechanism of action and their immunological activity, so as to deal with the high variability of HIV virus. In order to prepare a safe and efficient HIV vaccine, our laboratory will work with Dr. W. I. Sundquist of Utah University in the United States. Professor will affect the fusion of four nucleotide sequences of MA, which forms spherical VLP structure, with CA to form MA4-CA.Then it will be derived from rice, which is rich in Gan. The signal peptide of the amino acid sequence, GRP, is linked to the 3'end of the MA4-CA fusion gene. So that the CA vaccine expressed in Lycium barbarum is directed into the root cell gap and secreted from the root system into the culture medium. On the basis of this, the immunogenicity of CA recombinant vaccine expressed in plant tissues was further determined, which provided a basis for the use of transgenic Lycium barbarum to express HIV vaccine with low cost and more safety and effectiveness. Objectives of the study:. By using the secretory plant expression vector constructed in our laboratory, Lycium barbarum was transformed by Agrobacterium tumefaciens and positive clones were screened. Transgenic Lycium barbarum was identified from gene level and protein level. BALB/c mice were immunized with transgenic Lycium barbarum protein, and its immunogenicity was studied.
【學位授予單位】：山東省醫(yī)學科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R392;Q943.2

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