本文選題：蛋白質(zhì)組　切入點(diǎn)：雙向電泳　出處：《中國(guó)藥品生物制品檢定所》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：隨著人類基因組研究計(jì)劃的完成，生命科學(xué)的研究開始進(jìn)入后基因組時(shí)代。目前，蛋白質(zhì)組學(xué)的研究已經(jīng)成為21世紀(jì)生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域之一。本文通過構(gòu)建以雙向電泳(2-DE)相關(guān)方法為基礎(chǔ)的血漿蛋白質(zhì)組研究體系，針對(duì)人血液成分及其衍生物包括血漿、血清、紅細(xì)胞和人血白蛋白等不同樣本，采用比較蛋白質(zhì)組學(xué)的基本技術(shù)路線，進(jìn)行了蛋白質(zhì)組學(xué)的研究。 以正常人血漿樣本，建立和優(yōu)化了血漿蛋白質(zhì)的2-DE實(shí)驗(yàn)方法與信息處理方法，包括：(1)通過對(duì)雙胺銀染法和酸性銀染法檢測(cè)靈敏度的比較，確定了以酸性銀染法作為觀察電泳結(jié)果的基本方法，其靈敏度可達(dá)2ng，且膠板背景低于雙胺銀染法；(2)通過對(duì)等電聚焦過程電泳參數(shù)的調(diào)整和優(yōu)化，提高了2-DE圖譜的清晰度和穩(wěn)定性；(3)通過比較Albumin and lgG removal Kit對(duì)血漿樣本2-DE圖譜的影響，發(fā)現(xiàn)該試劑盒雖然對(duì)于白蛋白和球蛋白等高豐度蛋白具有顯著的去除作用，但同時(shí)對(duì)低豐度蛋白也存在非特異去除作用；(4)通過不同pH范圍的IPG膠條對(duì)血漿蛋白2-DE分離效果的比較，確定以窄pH膠條(pH4-7)分離血漿蛋白組分的效果明顯優(yōu)于寬pH膠條(pH3-10)；(5)確定了以軟件自動(dòng)找點(diǎn)功能與灰度分析相結(jié)合的差異蛋白斑點(diǎn)的基本比較方法。 以SDS-PAGE和2-DE方法，，分別對(duì)正常人血漿樣本、國(guó)產(chǎn)人血白蛋白樣品和國(guó)產(chǎn)重組人白蛋白樣品進(jìn)行電泳分離，采用膠體考染和銀染顯示電泳結(jié)果，以Labworks4.5軟件分析圖譜，比較了人血白蛋白(人血漿蛋白衍生物)的純度差異。結(jié)果顯示：(1)人血白蛋白樣品的SDS-PAGE和2-DE電泳純度低于現(xiàn)行方法的結(jié)果；(2)重組人白蛋白樣品含有明顯的宿主細(xì)胞蛋白。提示，SDS-PAGE和2-DE可以提高血液制品純度分析的靈敏度。 以2-DE方法比較了不同中和抗體效價(jià)的SARS康復(fù)患者血漿樣本(試驗(yàn)組)與正常人單采血漿樣本(對(duì)照組)蛋白譜的異同。結(jié)果顯示：(1)對(duì)照組樣本的2-DE圖譜出現(xiàn)蛋白斑點(diǎn)320±20個(gè)，試驗(yàn)組樣本出現(xiàn)蛋白斑點(diǎn)332±37個(gè)，二者主要斑點(diǎn)的位置與數(shù)量基本一致；(2)對(duì)照組中少量蛋白斑點(diǎn)的出現(xiàn)頻度不同；(3)試驗(yàn)組有6個(gè)蛋白點(diǎn)群與對(duì)照組出現(xiàn)差異，并在相同區(qū)域Ⅲ內(nèi)有3個(gè)蛋白斑點(diǎn)的灰度值出現(xiàn)變化，且灰度值變化與樣本的中和抗體效價(jià)值呈正相關(guān)性。以Capillary -LC／Q-TOF-ULTIMA進(jìn)行差異蛋白斑點(diǎn)的質(zhì)譜分析的結(jié)果顯示：灰度值出現(xiàn)下調(diào)的蛋白斑點(diǎn)為補(bǔ)體C3片段(Spot8)和結(jié)合珠蛋白前體(Spot9)，二者均為急性反應(yīng)蛋白。 以2-DE方法比較了EGFR外顯子19缺失突變的肺癌患者血清樣本(試驗(yàn)組)與正常人血清樣本(對(duì)照組)蛋白譜的異同。結(jié)果顯示：(1)對(duì)照組樣本的2-DE圖譜
[Abstract]:With the accomplishment of human genome project, life science research began to enter the post genome era. At present, proteomics research has become a hot research field of life sciences in twenty-first Century. This paper constructs by two-dimensional electrophoresis (2-DE) method based on plasma proteome research system for human blood components and plasma derivatives, serum, erythrocyte and Human Albumin different samples, using the basic technical route of comparative proteomics, the proteomics research.
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本文編號(hào)：1644548