本文選題：A型肉毒毒素(BTX-A)　切入點：川楝素　出處：《蘭州大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 背景與目的：A型肉毒毒素(botulinum toxin type A.BTX-A)選擇性地裂解突觸相關(guān)蛋白—25(synaptosomal-associated protein of 25 kDa，SNAP-25)，阻斷突觸囊泡中神經(jīng)遞質(zhì)與突觸前膜的融合、胞吐和釋放。川楝素(toosendanin，TSN)近期被證實通過阻斷BTX-A裂解SNAP-25而具有抗肉毒毒素功能。本研究依離體大鼠幽門平滑肌為實驗對象，應(yīng)用TSN阻斷BTX-A裂解SNAP-25后，觀察BTX-A是否仍對乙酰膽堿(acetylcholine，ACh)誘發(fā)的平滑肌收縮起抑制作用，以期揭示BTX-A對平滑肌存在的作用途徑。 方法：三組Sprague-Dawley大鼠的幽門離體平滑肌條在Krebs液中1g的前負荷下孵育52分鐘左右，待出現(xiàn)自發(fā)性收縮波且平穩(wěn)后分別加入ACh，BTX-A，TSN和Atropine。第一組(n=10)：肌條對ACh 1001μM出現(xiàn)反應(yīng)10分鐘后，分別加入Atropine 1μM(n=5)或BTX-A 10 U/ml(n=5)記錄4小時；第二組(n=10)：肌條對BTX-A 10U/ml(n=5)或AtropinelμM(n=5)出現(xiàn)反應(yīng)30分鐘后，加入ACh 100μM記錄4小時；第三組(n=5)：肌條在含TSN 29.6μM溶液中孵育20分鐘后，加BTX-A10U/ml，30分鐘后再加ACh 100μM記錄4小時。 結(jié)果：第一組：ACh 100μM顯著地增強了幽門收縮的張力(P＜0.001)和頻率(P＜0.001)，但振幅無顯著性差異；后續(xù)加入BTX-A 10 U/ml抑制了ACh誘發(fā)的收縮作用(張力，P＜0.001：頻率，P＜0.001；振幅，P=0.014)。然而，Atropine 1μM卻完全性抑制了ACh誘發(fā)的收縮反應(yīng)。這一結(jié)果顯示BTX-A10 U/ml直接抑制了ACh誘發(fā)的收縮反應(yīng)。 第二組：BTX-A 10 U/ml直接抑制了幽門自發(fā)性收縮(張力，P=0.006；頻率，P＜0.001；振幅，P＜0.001)；AtropinelμM同樣抑制了幽門肌的收縮。隨后加入ACh100μM不能再激發(fā)幽門肌的收縮。 第三組：TSN 29.6μM孵育20分鐘，，幽門平滑肌的自發(fā)性收縮末發(fā)生變化；加入BTX-A 10 U/ml后，BTX-A降低幽門肌收縮反應(yīng)(張力，P＜0.001；振幅，P＜0.001)。雖然這種抑制作用與未加TSN時BTX-A的效應(yīng)不盡相似，但是BTX-A10 U/ml仍然抑制了幽門平滑肌收縮，即使ACh 100μM也同樣不能激發(fā)它再收縮。 結(jié)論：A型肉毒毒素不僅抑制幽門平滑肌的自發(fā)性收縮，而且抑制了乙酰膽堿誘發(fā)的收縮；即使它介導(dǎo)SNAP-25裂解被川楝素阻斷后，也同樣抑制乙酰膽堿誘發(fā)的幽門部平滑肌收縮。這提示A型肉毒毒素不僅抑制膽堿能神經(jīng)中乙酰膽堿的釋放，而且抑制外源性乙酰膽堿與膽堿能毒蕈堿受體結(jié)合后產(chǎn)生的肌肉收縮反應(yīng)。
[Abstract]:Background & AIM: botulinum toxin type A.BTX-A selectively cleavage synaptosomal-associated protein of 25 kDaof SNAP-25 to block the fusion of neurotransmitters in synaptic vesicles and presynaptic membranes. Cytoemetic exocytosis and release. Toosendanin TSNs have recently been proved to have the function of anti-botulinum toxin by blocking BTX-A fragmentation of SNAP-25. In this study, the isolated rat pyloric smooth muscle was used as experimental object, and TSN was used to block SNAP-25 fragmentation by BTX-A. To observe whether BTX-A still inhibits the contraction of smooth muscle induced by acetylcholine acetylcholine acetylcholine in order to reveal the mechanism of BTX-A on smooth muscle. Methods: the isolated smooth muscle strips of three groups of Sprague-Dawley rats were incubated under the preload of 1 g in the Krebs solution for about 52 minutes, and after the spontaneous contraction wave appeared and stabilized, they were added into the ACh BTX-ACTN and Atropine respectively. The first group was treated with ACh 1001 渭 M for 10 minutes. The second group was incubated in the solution containing TSN 29.6 渭 M for 20 minutes. After 30 minutes of reaction to BTX-A 10 U / ml 5) or Atropinel 渭 MN 5), ACh 100 渭 M was added to the third group for 4 hours, and the third group was incubated in TSN 29.6 渭 M solution for 20 minutes, and the second group was incubated in the solution containing TSN 29.6 渭 M for 20 minutes, and the second group was incubated in the solution containing TSN 29.6 渭 M for 20 minutes after adding ACh 100 渭 M for 4 hours. BTX-A 10 U / ml for 30 minutes and ACh 100 渭 M for 4 hours. Results: in the first group, the tension and frequency of pyloric contraction were significantly enhanced by 1: ach 100 渭 M (P < 0.001), but there was no significant difference in amplitude. The subsequent addition of BTX-A10 U / ml inhibited the contraction induced by ACh (tension P < 0.001: frequency P < 0.001; amplitude P < 0.014). However, Atropine 1 渭 M completely inhibited the contraction induced by ACh, which indicated that BTX-A10 Ur / ml directly inhibited the contraction induced by ACh. The second group: BTX-A 10 U / ml directly inhibited the spontaneous contraction of pylorus (tension P0. 006; frequency P < 0. 001; amplitude P < 0. 001); Atropin 渭 M also inhibited the contraction of pyloric muscle. Then, the addition of ACh100 渭 M could not stimulate the contraction of pylorus. In the third group, the spontaneous contraction of pyloric smooth muscle changed after incubating with 29.6 渭 M for 20 minutes, and the contractile response of pyloric muscle was decreased after adding 10 Uml BTX-A (tension P < 0.001; amplitude P < 0.001). Although the inhibitory effect was not similar to that of BTX-A without TSN. However, BTX-A10 U / ml still inhibited the contraction of pyloric smooth muscle, and even ACh (100 渭 M) could not induce the contraction of pyloric smooth muscle. Conclusion botulinum toxin type A not only inhibits spontaneous contraction of pyloric smooth muscle, but also inhibits acetylcholine-induced contraction, even when SNAP-25 cleavage is blocked by azadirachtin. It also inhibited the contraction of pyloric smooth muscle induced by acetylcholine. This suggests that botulinum toxin A not only inhibits the release of acetylcholine from cholinergic nerves, It also inhibits the muscle contraction induced by the binding of exogenous acetylcholine to cholinergic muscarinic receptors.
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R33

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本文編號：1633299