本文選題：鼠疫耶爾森氏菌　切入點(diǎn)：DNA芯片　出處：《中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2006年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景：鼠疫是由鼠疫耶爾森氏菌(以下簡稱鼠疫菌)引起的一種烈性傳染病，其流行給人類帶來了巨大的災(zāi)難。鏈霉素、四環(huán)素與氯霉素為治療鼠疫的首選藥物�？股氐氖褂茫惯@種致死性疾病得到了有效控制。自然疫源地的存在、動(dòng)物間鼠疫的流行、不斷爆發(fā)的人間鼠疫以及多重耐藥株的出現(xiàn)，，迫使我們不得不重新面對(duì)這種古老的疾病。 鼠疫菌在體內(nèi)致病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是在巨噬細(xì)胞內(nèi)的生存繁殖，該菌與巨噬細(xì)胞相互作用后的轉(zhuǎn)錄組研究是揭示其體內(nèi)生存的機(jī)制和細(xì)胞反應(yīng)機(jī)制的重要依據(jù)。本研究室已經(jīng)開展了鼠疫菌對(duì)溫度轉(zhuǎn)換、低鎂離子、低鐵離子、低pH、高鹽、高滲、冷熱休克、H_2O_2、抗菌肽等環(huán)境條件下的比較轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究。針對(duì)鼠疫菌侵入機(jī)體后，還會(huì)遇到營養(yǎng)缺乏的環(huán)境因素刺激，我們對(duì)鼠疫菌進(jìn)行了體外模擬不同營養(yǎng)條件的轉(zhuǎn)錄譜研究；并對(duì)鼠疫菌與小鼠腹腔巨噬細(xì)胞在體內(nèi)相互作用后各自的轉(zhuǎn)錄譜進(jìn)行了研究。通過綜合分析體外模擬巨噬細(xì)胞內(nèi)各種脅迫條件的轉(zhuǎn)錄譜與體內(nèi)轉(zhuǎn)錄譜，為揭示鼠疫菌在胞內(nèi)生存的機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。 方法：本研究應(yīng)用鼠疫菌全基因組DNA芯片轉(zhuǎn)錄譜技術(shù)，研究了鼠疫菌在10×MIC鏈霉素、氯霉素和四環(huán)素的藥物濃度作用30min下的轉(zhuǎn)錄譜；高營養(yǎng)BHI培養(yǎng)基與低營養(yǎng)TMH培養(yǎng)基中對(duì)數(shù)生長期與穩(wěn)定期的轉(zhuǎn)錄譜；對(duì)數(shù)生長期與穩(wěn)定期不同營養(yǎng)培養(yǎng)基中鼠疫菌的轉(zhuǎn)錄譜；體內(nèi)鼠疫菌與小鼠腹腔巨噬細(xì)胞相互作用30min后鼠疫菌的轉(zhuǎn)錄譜以及小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄譜。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR對(duì)鏈霉素作用轉(zhuǎn)錄譜的結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證，應(yīng)用Cluster軟件對(duì)不同條件下鼠疫菌的轉(zhuǎn)錄譜結(jié)果進(jìn)行了聚類分析。 結(jié)果：RT—PCR驗(yàn)證了轉(zhuǎn)錄譜數(shù)據(jù)的可靠。鏈霉素、氯霉素以及四環(huán)素作用的差異基因345、712和177個(gè)，獲得了三種抗生素作用于鼠疫菌的主要影響基因，通過聚類分析對(duì)三種不同抗生素的分子作用機(jī)理進(jìn)行了認(rèn)識(shí)。不同營養(yǎng)條件下對(duì)數(shù)生長期與穩(wěn)定期的差異基因分別為246個(gè)和76個(gè)，對(duì)數(shù)生長期與穩(wěn)定生長期在不同營養(yǎng)環(huán)境中差異基因分別為244個(gè)與251個(gè)，獲得了鼠疫菌在不同生長時(shí)期與營養(yǎng)環(huán)境下的基因轉(zhuǎn)錄特點(diǎn)，并對(duì)產(chǎn)生不同轉(zhuǎn)錄特點(diǎn)的分子機(jī)理進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)了鼠疫毒力相關(guān)基因在低營養(yǎng)環(huán)境中的轉(zhuǎn)錄特點(diǎn)。在體內(nèi)鼠疫菌與巨噬細(xì)胞相互作用30分鐘后鼠疫菌與小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的差異基因?yàn)?34個(gè)和59個(gè)。細(xì)菌體內(nèi)轉(zhuǎn)錄譜的結(jié)果表明，在感染早期，鼠疫菌T3SS系統(tǒng)的轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào)，表明該系統(tǒng)在鼠疫菌致病過程中的重要作用。通過鼠疫菌體內(nèi)轉(zhuǎn)錄譜與體外條件轉(zhuǎn)錄譜的聚類綜合分析，初步獲得一些與病原體在體內(nèi)生長相關(guān)的基因及與致病性密切相關(guān)的毒力基因。 結(jié)論：通過研究共獲得鼠疫菌在不同條件下的8個(gè)標(biāo)識(shí)轉(zhuǎn)錄譜和一個(gè)小鼠巨噬細(xì)胞在體內(nèi)與感染鼠疫菌相互作用的標(biāo)識(shí)轉(zhuǎn)錄譜，從分子水平揭示了鼠疫菌在不同藥物作用、不同生長階段與不同營養(yǎng)條件以及在體內(nèi)與巨噬細(xì)胞相互作用的不同轉(zhuǎn)錄特征。鼠疫菌與巨噬
[Abstract]:Background: the plague by Jerson S (hereinafter referred to as the plague bacteria Yersinia pestis) an acute infectious disease caused by the epidemic, bring great disaster. Streptomycin, tetracycline and chloramphenicol as the preferred drug for the treatment of plague. The use of antibiotics, the fatal disease has been effectively controlled. The natural foci exist. Animal plague epidemic outbreak of plague and the continuous emergence of multi drug resistance strains, forcing us to face this ancient disease.
The key link in vivo pathogenic Yersinia pestis is survival and reproduction in macrophages, transcriptome analysis of the bacteria and macrophages after interaction is an important basis for revealing the in vivo survival mechanism and cell reaction mechanism. This study has been carried out for low temperature conversion of Yersinia pestis, magnesium ion, iron ion, low pH. High salt, high permeability, cold shock, H_2O_2, study of comparative transcriptome of antimicrobial peptides and other environmental conditions. For the bacteria invade the body, will encounter environmental factors lack of nutrition stimulation, we conducted a study of in vitro transcription spectrum simulation of different nutritional conditions of Yersinia pestis; and of Yersinia pestis and mouse peritoneal macrophages the in vivo interaction after their transcription spectrum was studied. Through the comprehensive analysis of in vitro transcription in macrophages of various stress spectrum and in vivo transcription profile, in order to reveal the intracellular Yersinia pestis The mechanism of survival lays the foundation.
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本文編號(hào)：1620145