發(fā)布時間：2018-03-15 08:01

  本文選題：臍帶血　切入點：造血干細胞　出處：《南京醫(yī)科大學》2006年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：第一部分 人臍血CD34~+造血干細胞的分離、純化及鑒定 目的：探討人臍血CD34~+造血干細胞的分離、純化及鑒定方法。 方法：選擇我院足月妊娠產(chǎn)婦，，產(chǎn)前檢查HBsAg和抗-HCV均陰性，收集其臍血。密度梯度離心分離單個核細胞，再通過免疫磁式分選法(magnetic activating cell sorting，MACS)收集CD34~+的造血干細胞。純化得到的干細胞直接用于細胞移植，或加入凍存液后置于液氮中備用。應用流式細胞術分析檢測CD34~+造血干細胞的表面標志。 結果：經(jīng)密度梯度離心后，得到的MNC數(shù)約為每份臍血WBC的1／10。而每份MNC經(jīng)純化后，得到的CD34~+細胞數(shù)約為起始細胞數(shù)的1／100。流式細胞儀檢測MNC和經(jīng)純化后CD34~+細胞的含量，每份標本CD34~+細胞的回收率波動于17.8～24.1％，其平均值為20.7％。純化的人臍血CD34~+細胞經(jīng)流式細胞儀檢測，CD34~+陽性百分率均值為92％，最高為98％。 結論：通過免疫磁式分選法可從人臍血中篩選出高純度的CD34~+造血干細胞。 第二部分 HGF質(zhì)粒尾靜脈注射促使體內(nèi)高表達 目的：采用質(zhì)粒尾靜脈快速輸注獲得HGF小鼠體內(nèi)高表達。 方法：抽提擴增HGF質(zhì)粒，并酶切鑒定。將不同劑量的HGF質(zhì)粒通過尾靜脈快速注入6-8周的NOD／SCID小鼠體內(nèi)，ELISA法檢測
[Abstract]:The first part: isolation, purification and identification of CD34 ~ ~ hematopoietic stem cells from human umbilical cord blood. Objective: to study the isolation, purification and identification of human umbilical cord blood CD34 ~ hematopoietic stem cells. Methods: HBsAg and anti-HCV were negative in pregnant women in our hospital. The umbilical cord blood was collected and mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. Then the CD34 ~ hematopoietic stem cells were collected by magnetic activating cell sorting method. The purified stem cells were directly used in cell transplantation. The surface markers of CD34 ~ hematopoietic stem cells were detected by flow cytometry. Results: the number of MNC obtained by density gradient centrifugation was about 1 / 10 of that of WBC in umbilical blood. After purification of MNC, the number of CD34 ~ cells obtained was about 1 / 100 of the number of initial cells. Flow cytometry was used to detect the content of MNC and purified CD34 ~ cells. The recovery rate of CD34~ cells in each specimen fluctuated from 17.8 to 24.1.The average value was 20.7.The percentage of CD34~ + in purified human umbilical cord blood detected by flow cytometry was 922 ~ + and the highest was 98 ~ +. Conclusion: high purity CD34 ~ hematopoietic stem cells can be screened from human umbilical cord blood by immunomagnetic sorting. The second part of HGF plasmid injection into caudal vein to promote high expression in vivo. Objective: to obtain high expression in HGF mice by rapid infusion of plasmid tail vein. Methods: HGF plasmids were extracted and amplified, and identified by enzyme digestion. HGF plasmids of different dosages were injected into NOD/SCID mice for 6-8 weeks by tail vein and detected by Elisa.
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R329.2

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本文編號：1615134