本文選題：PTEN　切入點(diǎn)：活性氧　出處：《青島大學(xué)》2006年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：Pten作為第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的具有磷酸酶功能的抑癌基因,在多種腫瘤中存在高頻率缺失或突變。據(jù)估計(jì),總體突變率相當(dāng)于著名的腫瘤抑制基因p53,是目前腫瘤研究的熱點(diǎn)基因之一。 培育基因敲除小鼠是深入研究基因功能的最重要手段之一,先后有四家實(shí)驗(yàn)室成功培育了Pten的基因敲除小鼠。MEF1/Pten~(-/-)和MEF2/Pten~(-/-)是由Hong wu博士的實(shí)驗(yàn)室建立的PTEN缺失的胚胎成纖維細(xì)胞株,是由原代培養(yǎng)的PTEN基因敲除小鼠的胚胎成纖維細(xì)胞永生化而來(lái),我們以此為試驗(yàn)?zāi)Ｐ烷_(kāi)展研究。 為了研究PTEN調(diào)控細(xì)胞各項(xiàng)生命活動(dòng)的新機(jī)制,第一階段:我們采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)來(lái)進(jìn)行蛋白篩選,首先通過(guò)雙向電泳技術(shù),比較了PTEN缺失的胚胎成纖維細(xì)胞與正常胚胎成纖維細(xì)胞蛋白表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)在兩株不同的PTEN缺失的胚胎成纖維細(xì)胞中有明顯表達(dá)差異的蛋白,隨后利用質(zhì)譜技術(shù)鑒定及生物信息學(xué)檢索分析,找出在Pten基因敲除小鼠的胚胎成纖維細(xì)胞中,抗氧化酶Cu/Zn-SOD、PeroxiredoxinⅤ-Ⅵ,細(xì)胞遷移相關(guān)蛋白Cofilin 1、GDI2,其他如LMW-PTP、Tagln 2等十多個(gè)表達(dá)差異蛋白;第二階段:對(duì)篩選出的差異表達(dá)蛋白進(jìn)一步進(jìn)行分子生物學(xué)技術(shù)鑒定,并對(duì)部分蛋白進(jìn)行了相應(yīng)的生物學(xué)活性檢測(cè)。在此研究中,我們主要采用MEF2/Pten~(-/-)細(xì)胞系作為試驗(yàn)對(duì)象,對(duì)MEF1/Pten~(-/-)細(xì)胞系的蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果只作為參照研究,結(jié)果如下: 1.在Pten基因敲除小鼠的胚胎成纖維細(xì)胞中,Northern blot及Western blot結(jié)果顯示:Cu/Zn-SOD在mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平均高于正常胚胎成纖維細(xì)胞,而且酶活性也明顯增強(qiáng);以流式細(xì)胞儀進(jìn)行熒光探針標(biāo)記活性氧檢測(cè)發(fā)現(xiàn):細(xì)胞中O_2含量明顯增加。提示Pten基因敲除后,細(xì)胞內(nèi)發(fā)生了氧化應(yīng)激反應(yīng),O_2的增加及AKT信號(hào)的增強(qiáng)刺激了Cu/zn-SOD的表達(dá)。 2.在Pten基因敲除小鼠細(xì)胞中,通過(guò)Northern blot及Western blot檢測(cè),結(jié)果顯示:在PRX家族中,PRX Ⅰ-Ⅴ在mRNA及蛋白質(zhì)水平均高表達(dá),但只有PRX Ⅵ低表達(dá)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)H_2O_2含量明顯下降,在給予0.5mM H_2O_2刺激后,細(xì)胞內(nèi)H_2O_2水平發(fā)生了翻轉(zhuǎn),明顯高于對(duì)照細(xì)胞,而正常對(duì)照細(xì)胞中變化不明顯。結(jié)果提示在Pten敲除細(xì)胞中,氧化與抗氧化平衡已被破壞,細(xì)胞內(nèi)PRX家族在清除H_2O_2方面可能發(fā)生了重要作用。在Pten基因與氧化劑之間、SOD與PRX Ⅵ之間可能存在著負(fù)調(diào)控。 3.Pten基因敲除后,Northern blot及RT-PCR結(jié)果顯示,細(xì)胞中遷移相關(guān)蛋白Cofilin 1表達(dá)上調(diào),而GDI2顯示下調(diào),符合惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移表型。 4.其他蛋白:LMW-PTP,Tagln2 mRNA低表達(dá),與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。 通過(guò)本研究我們發(fā)現(xiàn),Pten基因敲除后,細(xì)胞內(nèi)發(fā)生了氧化應(yīng)激反應(yīng),原有的氧化與抗氧化平衡失調(diào),總體抗氧化能力下降,抗氧化酶Cu/zn-SOD和PRX的表達(dá)也產(chǎn)生了適應(yīng)性調(diào)整,氧化劑與PTEN之間可能存在著負(fù)調(diào)控,并有AKT信號(hào)通路的參與。檢測(cè)出的其它幾種蛋白狀
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類(lèi)號(hào)】：R-332

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 曹衛(wèi)紅;胡森;盛志勇;;腸缺血再灌注損傷發(fā)病機(jī)制及防治[J];感染.炎癥.修復(fù);2004年Z1期

2 朱波;陳安民;郭風(fēng)勁;;體外RNA干擾抑制ACP1對(duì)骨肉瘤細(xì)胞侵襲的影響[J];華中醫(yī)學(xué)雜志;2009年04期

3 李巍偉;張偉;夏曉紅;王燕凌;王惠娟;;不同年齡實(shí)驗(yàn)大鼠腎臟缺血再灌注的比較研究[J];華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年06期

4 光紅梅,張岫美,李應(yīng)全,魏欣冰,王姿穎,劉彗青;羥乙基葛根素對(duì)過(guò)氧化氫致牛腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用(英文)[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2005年03期

5 ;RNAi下調(diào)ACP1對(duì)胃肉瘤細(xì)胞MG63轉(zhuǎn)移能力的影響(英文)[J];Chinese-German Journal of Clinical Oncology;2009年08期

6 張偉;王燕凌;王惠娟;苗智慧;夏曉紅;;維生素E在青年和老年大鼠腎臟缺血/再灌注損傷中的作用[J];中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志;2010年02期

7 卜暉;李春巖;劉曉云;李哲;李彬;孫萌萌;;抗氧化反應(yīng)元件活化劑對(duì)選擇性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用[J];中華神經(jīng)科雜志;2007年01期

8 宋瑞;高秉仁;趙啟明;張蓓;楊X;;鋅對(duì)體外循環(huán)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J];中華小兒外科雜志;2007年10期

9 ;Isolation of a novel member of small G protein superfamily and its expression in colon cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2003年08期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前5條

1 白靜;轉(zhuǎn)染ALDH2基因?qū)ｑR神經(jīng)元的保護(hù)作用及其機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2011年

2 曹衛(wèi)紅;腸道部分缺血再灌注損傷致多器官功能障礙動(dòng)物模型和發(fā)病機(jī)理的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2004年

3 李哲;蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸激酶JAK2～（V617F）抑制劑Erlotinib的發(fā)現(xiàn)和蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶SHP-1與SHP-2相互作用的鑒定[D];吉林大學(xué);2007年

4 申興桂;肝再生磷酸酶3的活性研究[D];吉林大學(xué);2007年

5 朱波;RNA干擾抑制ACP1對(duì)前列腺癌T3B細(xì)胞的影響[D];華中科技大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 王瑞玲;蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1在哮喘小鼠肺組織的表達(dá)及其與氣道炎癥的關(guān)系[D];鄭州大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：1584451