本文關(guān)鍵詞： 星形膠質(zhì)細(xì)胞 CD81 增殖 細(xì)胞周期　出處：《華中科技大學(xué)》2006年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】： CD81分子,即抗增生抗體識(shí)別的靶抗原(Target of the Antiproliferative Antibody-1, TAPA-1),從其結(jié)構(gòu)上來(lái)看屬于四跨膜區(qū)蛋白( tetraspanin )超家族成員,含有4個(gè)跨膜轉(zhuǎn)膜區(qū)和2個(gè)胞外區(qū),在除紅細(xì)胞、血小板和神經(jīng)元以外的其它細(xì)胞中表達(dá),可影響細(xì)胞的粘附、激活、增殖和分化,有改變細(xì)胞形態(tài)、抑制合胞體形成、參與信號(hào)傳導(dǎo)等生物學(xué)功能。星形膠質(zhì)細(xì)胞是具有增殖能力的細(xì)胞,許多細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子參與了星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖與分化的調(diào)節(jié)。有文獻(xiàn)報(bào)道:在不同分化狀態(tài)的星形膠質(zhì)細(xì)胞中CD81的表達(dá)也不同。本室的研究也發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞在未匯合時(shí)CD81的表達(dá)較低,隨著星形膠質(zhì)細(xì)胞密度的不斷增加至細(xì)胞匯合時(shí),CD81的表達(dá)也逐漸增強(qiáng)。這表明CD81影響了星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖,但究竟有何影響尚不清楚。 本課題的第一部分對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行了培養(yǎng),通過(guò)繪制星形膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)和增殖指數(shù)曲線(xiàn),探討了體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)特性,為深入研究星形膠質(zhì)細(xì)胞的功能奠定了基礎(chǔ)。本課題的第二部分通過(guò)在體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞中加入外源性抗CD81抗體,觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖情況和細(xì)胞周期的進(jìn)程,探討了CD81在星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖中的作用。第一部分,我們?cè)谝欢屋^長(zhǎng)的時(shí)間范圍內(nèi)觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,研究了純化培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的體外生長(zhǎng)特性。我們將純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞分為6h、12h、18h、24h、30h、36h、42h、48h、54h、60h、72h、84h、96h、120h 14個(gè)時(shí)間組,培養(yǎng)不同的時(shí)間后,采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期各時(shí)相的變化并繪制增殖指數(shù)曲線(xiàn),所得數(shù)據(jù)用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:①星形膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)可明顯的分為三個(gè)階段:第一階段為0至24h,在此時(shí)間內(nèi)生長(zhǎng)曲線(xiàn)平緩上升,其斜率為0.64。第二階段為24h至84h,在此時(shí)間內(nèi)生長(zhǎng)曲線(xiàn)急劇上升,其斜率為2.69;此階段中24h至48h時(shí)曲線(xiàn)最陡,斜率為3.94,細(xì)胞呈指數(shù)生長(zhǎng)。第三階段為84h至120h,在此時(shí)間內(nèi)生長(zhǎng)曲線(xiàn)走勢(shì)平直,其斜率為-0.005。②星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖指數(shù)在第一個(gè)細(xì)胞增殖周期內(nèi)可以反映細(xì)胞的增殖狀態(tài),第一個(gè)細(xì)胞周期結(jié)束后,細(xì)胞的數(shù)量繼續(xù)上升增殖指數(shù)卻降低了。以上結(jié)果表明:培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程分為潛伏期、指數(shù)生長(zhǎng)期和停滯期三個(gè)階段,其潛伏期為0至24h,指數(shù)生長(zhǎng)期為24h至48h,停滯期為84h以后。單純用增殖指數(shù)等類(lèi)似的指標(biāo)作為細(xì)胞增殖狀態(tài)的判斷標(biāo)準(zhǔn)是有一定局限性的,一定要將這些指標(biāo)與細(xì)胞數(shù)量結(jié)合起來(lái)分析。 第二部分,我們?cè)谂囵B(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞加入抗CD81抗體,研究了抗CD81抗體在星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖中的作用。方法:將純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞分為六組,加入不同濃度的抗CD81抗體,其濃度依次為0μg/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml,以MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活性。在此檢測(cè)結(jié)果的基礎(chǔ)上,選出三個(gè)有意義的濃度(0μg/ml、0.5μg/ml、5μg/ml)。加入以上濃度的抗CD81抗體,采用流式細(xì)胞術(shù)觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞周期的改變,所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:MTT的結(jié)果顯示加入抗CD81抗體后星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量明顯減少,并呈一定的劑量依賴(lài)性。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示加入抗CD81抗體培養(yǎng)24小時(shí)后,實(shí)驗(yàn)組的星形膠質(zhì)細(xì)胞處于G0/G1期的細(xì)胞指數(shù)減少、S期細(xì)胞指數(shù)增多。MTT和流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明:抗CD81抗體抑制了星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖,使星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞周期受阻,細(xì)胞阻滯于S期。結(jié)論: (一)、體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程可分為潛伏期、指數(shù)生長(zhǎng)期和停滯期三個(gè)階段。其潛伏期為0至24h,指數(shù)生長(zhǎng)期為24h至48h,停滯期為84h以后。細(xì)胞增殖的停滯與接觸抑制有關(guān)。 (二)、單純用增殖指數(shù)等類(lèi)似的指標(biāo)作為細(xì)胞增殖狀態(tài)的判斷標(biāo)準(zhǔn)是有一定局限性的,一定要將這些指標(biāo)與細(xì)胞數(shù)量結(jié)合起來(lái)分析。 (三)、抗CD81抗體抑制了星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖,使星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞周期受阻,細(xì)胞阻滯于S期。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 朱啟星;馬泰;涂登云;沈彤;丁銳;;銀杏葉提取物對(duì)三氯乙烯誘導(dǎo)的人角質(zhì)形成細(xì)胞NO合成的影響[J];癌變.畸變.突變;2006年06期

2 劉家仁,龐永s，

本文編號(hào)：1552513