本文關鍵詞： Tim-2基因 BALB/c小鼠 L929細胞 真核表達 鐵蛋白 Tim-2基因 昆明小鼠 單核苷酸多態(tài)性　出處：《華中科技大學》2007年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 第一部分小鼠Tim-2基因在L929細胞表達后促進鐵蛋白的內(nèi)吞 目的:獲取BALB/c小鼠T細胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白-(2T cell immunoglobulin and mucin domain containing molecules-2, Tim-2)基因,構建真核表達載體在L929細胞中表達并研究其功能。 方法:RT-PCR獲取BALB/c小鼠Tim-2基因,T-A克隆后經(jīng)測序鑒定后酶切,插入pEGFP-N1真核表達載體,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染L929細胞,熒光顯微鏡觀察外源基因的表達,然后加入鐵蛋白與轉(zhuǎn)染細胞作用。 結(jié)果:外源基因在L929細胞中得到高效表達,熒光顯微鏡的結(jié)果顯示,外源基因定位于細胞膜上,并能促進細胞對鐵蛋白的內(nèi)吞。 結(jié)論:Tim-2基因在真核細胞中表達后定位于細胞膜上,并促進細胞對鐵蛋白的內(nèi)吞。 第二部分昆明小鼠Tim-2基因的單個核苷酸變異的研究 目的:研究T細胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白(T cell immunoglobulin-and mucin-domain-containing molecules, Tim)基因家族的成員之一  Tim-2基因在昆明鼠體內(nèi)的單核苷酸多態(tài)性,以提示昆明鼠在腫瘤學和免疫學的相關試驗中有可能出現(xiàn)的與國際通用的其它品系小鼠(如BALB/c小鼠)不同的生物學特性。 方法:取不同來源的五只昆明小鼠的肝組織,提取總RNA后逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA,使用特異性引物通過PCR擴增得到Tim-2基因,克隆后測序,然后比較測序圖譜。 結(jié)果:測序結(jié)果與Genebank中的Tim-2序列相比,451(TCC→GCC:絲氨酸→丙氨酸),502,504(CCA→TCT:脯氨酸→絲氨酸),586,587(GAT→TCT:天冬氨酸→絲氨酸)。其他變異位點無氨基酸改變。 結(jié)論:提示昆明小鼠與國際通用的其它品系小鼠(如BALB/c小鼠)Tim-2基因所編碼的蛋白質(zhì)序列有差異,在使用昆明小鼠進行免疫學相關的試驗研究的過程中應該注意到由于這種不同所造成的對實驗結(jié)果的影響。
[Abstract]:The first part of mouse Tim-2 gene expression in L929 cells promotes the endocytosis of ferritin. Aim: to construct the eukaryotic expression vector of BALB/c mouse T cell immunoglobulin domain mucin domain protein (-TX) -2T cell immunoglobulin and mucin domain containing (Tim-2) gene, and to study its function in L929 cells. Methods BALB/c mouse Tim-2 gene was cloned by RT-PCR and sequenced, then inserted into pEGFP-N1 eukaryotic expression vector. L929 cells were transfected with liposome. The expression of exogenous gene was observed by fluorescence microscope, then ferritin was added to the transfected cells. Results: the extraneous gene was highly expressed in L929 cells. Fluorescence microscopy showed that the exogenous gene was located on the cell membrane and could promote the uptake of ferritin in L929 cells. Conclusion the expression of the gene was located on the cell membrane and promoted the endocytosis of ferritin in the eukaryotic cells. Part II study on single nucleotide variation of Tim-2 gene in Kunming mice. Objective: to study the single nucleotide polymorphism of Tim-2 gene of T cell cell immunoglobulin-and mucin-domain-containing (Tims) gene in Kunming mice. These results suggest that Kunming mice may have different biological characteristics from other strains of mice (such as BALB/c mice) in oncology and immunology. Methods: the liver tissues of five Kunming mice from different sources were taken, the total RNA was extracted by reverse transcription, the Tim-2 gene was amplified by PCR with specific primers, cloned and sequenced, and then the sequence map was compared. Results: compared with the Tim-2 sequence in Genebank, the result of sequencing was 451 TCCs. 鈫扜CC: serine. 鈫扐lanine stoma 502CBA 504CCA. 鈫扨roline. 鈫扴erine 586 GAT. 鈫扐spartic acid. 鈫扴erine. No amino acid changes at other mutation sites. Conclusion: the results suggest that there are differences in protein sequences between Kunming mice and other strains of mice (such as BALB/c mice). The effect of this difference on the experimental results should be taken into account in the use of Kunming mice in immunological related experimental studies.
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R392

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