本文關(guān)鍵詞： 日本血吸蟲 SjIR3 mGM-CSF 核酸疫苗 免疫保護(hù)力　出處：《湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 疫苗是防治傳染病的有效手段，作為一種相對便宜且長效的防治措施，研制出血吸蟲病的疫苗一直是科學(xué)家們追求的目標(biāo)。血吸蟲病疫苗的研究經(jīng)歷了從死疫苗、致弱活疫苗、亞單位疫苗到基因工程疫苗的探索過程。核酸疫苗是血吸蟲疫苗研究的重要內(nèi)容。現(xiàn)階段研制的血吸蟲核酸疫苗候選分子所誘導(dǎo)的保護(hù)力比較弱，保護(hù)不完全，因此有必要提高疫苗分子的免疫誘導(dǎo)力和尋找新的疫苗候選分子。 1．本研究是通過由日本血吸蟲cDNA文庫篩選出的新基因(SjIR3)與真核表達(dá)載體pCDNA3.0構(gòu)建出重組質(zhì)粒SjIR3／pC，并以生理鹽水(100μl)、空白質(zhì)粒pCDNA3.0(50μg)為對照免疫KM小鼠(每組18只)，免疫方案是0-2-4-6，每次免疫前及攻擊感染前于尾靜脈采血進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)檢測抗體滴度。末次免疫后2w，各組剖殺任意6只小鼠取脾細(xì)胞，分別用ConA或rSjIR3重組蛋白誘導(dǎo)，，MTT法檢測淋巴細(xì)胞增殖。各組余下小鼠經(jīng)腹部感染日本血吸蟲尾蚴40±1條，45d后宰殺，觀察實(shí)驗(yàn)組小鼠的減蟲率和減卵率。其結(jié)果顯示，SjIR3／pC可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較高抗體水平(0.78±0.05)，ConA或rSjIR3重組蛋白誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖結(jié)果分別為0.57±0.02、0.68±0.01，減蟲率和減卵率分別是29.4％、36.6％。 2．首次構(gòu)建了鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(mGM-CSF)與血吸蟲基因的共表達(dá)載體(SjIR3-GMCSF／pC)，并設(shè)計(jì)了生理鹽水(100μl)、空白質(zhì)粒pCDNA3.0、SjIR3／pC、mGM—CSF／pC和SjIR3-GMCSF／pC(50μg)五組小鼠實(shí)驗(yàn)，其免疫方案、攻擊感染、檢測方法同前。結(jié)果顯示，SjIR3／pC組與SjIR3-GMCSF／pC誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的抗體水平分別為0.78±0.04、0.91±0.03；ConA或rSjIR3重組蛋白誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率明顯增加，其A_(570)分別為0.56±0.07和0.68±0.05、0.56±0.07和0.77±0.04；減蟲率和減卵率分別是39.81％、34.75％和33.96％、28.43％。 結(jié)論：SjIR3 DNA疫苗能夠誘導(dǎo)受攻擊感染的小鼠產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫而具有部分抗攻擊感染的免疫保護(hù)作用。mGM-CSF可增強(qiáng)SjIR3DNA疫苗誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答和抗攻擊感染的免疫保護(hù)作用。SjIR3 DNA疫苗免疫誘導(dǎo)家畜等產(chǎn)生的免疫應(yīng)答和抗攻擊感染的保護(hù)效果值得進(jìn)一步研究，SjIR3 DNA疫苗可能成為血吸蟲“雞尾酒疫苗”的組成成分。
[Abstract]:The vaccine is effective in the prevention and treatment of infectious diseases, as a relatively inexpensive and effective prevention measures, development of schistosomiasis vaccine scientists are pursuing. Research on schistosomiasis vaccine has experienced from dead vaccine, attenuated vaccine, subunit vaccine to explore the process of genetic engineering vaccine of nucleic acid vaccine is important. The content of vaccine against Schistosoma japonicum. Protection induced by current developed schistosome nucleic acid vaccine candidate molecules is relatively weak, the protection is not complete, so it is necessary to improve the vaccine induced molecular force and looking for new molecules for vaccine.
1. in this study by screening new genes of Schistosoma japonicum cDNA library from Japan (SjIR3) and eukaryotic expression vector pCDNA3.0 to construct recombinant plasmid SjIR3 / pC, and normal saline (100 L), blank plasmid pCDNA3.0 (50 g) were immunized KM mice (n = 18), immune scheme 0-2-4-6, before each vaccination and attack before infection in the tail vein blood antibody titer ELISA assay. 2W after the last immunization, 6 mice of each group were sacrificed randomly from spleen cells treated with ConA or rSjIR3 recombinant protein induced lymphocyte proliferation was detected by MTT. All remaining mice by abdominal infection of Schistosoma japonicum cercariae 40 + 1, 45d after slaughter, the experimental group of mice the worm and egg reduction rates. The results showed that SjIR3 / pC can produce higher levels of antibodies in mice induced by (0.78 + 0.05), ConA or rSjIR3 recombinant protein induced lymphocyte proliferation results were 0.57 + 0.02,0.6 8 + 0.01, the rate of worm reduction and the rate of egg reduction were 29.4%, 36.6%.
2. for the first time established murine granulocyte macrophage colony stimulating factor (mGM-CSF) gene co expression with schistosome vector (SjIR3-GMCSF / pC), and the design of normal saline (100 L), blank plasmid pCDNA3.0, SjIR3 / pC, mGM, CSF / pC and SjIR3-GMCSF / pC (50 g) five groups the mice, the immune attack scheme, infection, with the detection method. The results showed that the antibody level of SjIR3 / pC and SjIR3-GMCSF / pC mice induced by respectively 0.78 + 0.04,0.91 + 0.03; lymphocytes induced by ConA or rSjIR3 recombinant protein conversion rate increased significantly, the A_ (570) were 0.56 + 0.07 and 0.68 + 0.05,0.56 + 0.07 and 0.77 + 0.04; the worm and egg reduction rates were 39.81%, 34.75% and 33.96%, 28.43%.
Conclusion: SjIR3 DNA vaccine can be worthy of further research on the immune response induced by infection induced humoral and cellular immunity and immune effects of.MGM-CSF protection against challenge infection can enhance SjIR3DNA vaccine induced humoral and cellular immune response and anti infection immune protection against the immune effect of.SjIR3 induced by DNA vaccine in livestock. The attack and anti infection protection effect, composition of SjIR3 DNA vaccine of Schistosoma japonicum may become a "cocktail vaccine".

【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R392

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本文編號：1493801