本文關(guān)鍵詞： 幽門螺桿菌 表位 尿素酶 粘附素 工程菌　出處：《四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)》2014年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的構(gòu)建含有幽門螺桿菌尿素酶(UreI、UreB)及粘附素(HpaA)的多表位原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)/ureI-ureB-hpaA〔pET28a(+)/IBA〕及相應(yīng)的原核表達(dá)工程菌,研究其表達(dá)特性。方法通過生物信息學(xué)方法從ureI、ureB和hpaA基因中篩選T細(xì)胞和B細(xì)胞優(yōu)勢表位基因序列,人工合成并構(gòu)建原核重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)/IBA。經(jīng)限制性內(nèi)切酶(NdeⅠ,XhoⅠ)酶切鑒定及DNA測序鑒定后導(dǎo)入大腸桿菌BL21(DE3)。該工程菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,用SDS-PAGE檢測重組蛋白(rIBA)的表達(dá)情況,以抗幽門螺桿菌悉尼株(SS1株)特異卵黃抗體采用Western blot檢測rIBA的抗原性。結(jié)果構(gòu)建的多表位原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)/IBA雙酶切和測序鑒定與設(shè)計序列100%一致。工程菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后SDS-PAGE電泳顯示在相對分子質(zhì)量40×103左右有一條明顯蛋白條帶,Western blot顯示有相應(yīng)位置特異反應(yīng)條帶。結(jié)論成功構(gòu)建幽門螺桿菌多表位重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)/IBA及相應(yīng)原核表達(dá)工程菌,該工程菌表達(dá)的rIBA具有抗原性,表明該重組蛋白與幽門螺桿菌有高度相關(guān)性。
[Abstract]:Objective to construct UreI containing Helicobacter pylori urease. Prokaryotic expression plasmid pET28a of UreB and HpaA. And the corresponding prokaryotic expression engineering bacteria. Methods T cell and B cell dominant epitope gene sequences were screened from ureIureB and hpaA genes by bioinformatics. The prokaryotic recombinant expression plasmid pET28a was synthesized and constructed. Xho 鈪，

本文編號：1479552