本文關(guān)鍵詞： CRISPR系統(tǒng) 大腸埃希菌 噬菌體 噬菌體耐受　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報》2014年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：人工設(shè)計合成規(guī)律成簇的間隔短回文重復(fù)(CRISPR)序列特異性引物,將從臨床分離的大腸埃希菌株作為模板,采用PCR擴增方法篩選含有CRISPR系統(tǒng)的大腸埃希菌;利用噬菌斑法從醫(yī)院未經(jīng)消毒處理的污水中分離大腸埃希菌噬菌體,經(jīng)過PEG沉淀的方法濃縮得到高滴度的噬菌體,再用該篩選噬菌體感染上述含有CRISPR的大腸埃希菌以篩選耐受該噬菌體的大腸埃希菌菌株。最后從70株大腸埃希菌中篩選到42株含有CRISPR序列的菌株,然后采用噬菌斑法分離到1株大腸埃希菌E.coli 147-30的裂解性噬菌體IME-EC1,在此基礎(chǔ)上利用E.coli 147-30篩選到1株耐受噬菌體IME-EC1的大腸埃希菌菌株,命名為E.coli 147-30R1。
[Abstract]:A sequence specific primer was designed for the synthesis of clusters of short palindromes repeats (CRISPRs), using clinical isolates of Escherichia coli as a template. Escherichia coli containing CRISPR system was screened by PCR amplification. The bacteriophage of Escherichia coli was isolated from unsterilized sewage of hospital by plaque method. The phage with high titer was obtained by PEG precipitation. The screening phage was used to infect the Escherichia coli containing CRISPR to screen Escherichia coli strains tolerant to the phage. Finally, 42 strains containing CRISPR were screened out of 70 strains of Escherichia coli. A sequence of strains. A lytic phage IME-EC1 of E. coli 147-30 was isolated by plaque method. On this basis, a Escherichia coli strain resistant to phage IME-EC1 was screened by E.coli 147-30, named E. coli 147-30R1.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué);軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所 病原微生物生物安全國家重點實驗室;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院臨床檢驗科;
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃“863計劃”(編號:2012AA022003) “艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治”科技重大專項“十二五”實施計劃(編號:2013ZX10004-605、2013ZX10004-217、2013ZX10004-607、2011ZX10004-001) “重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項“十二五”實施計劃(編號:2011ZX09401-023) 國家自然科學(xué)基金(編號:81072350) 病原微生物生物安全國家重點實驗室開放課題(編號:SKLPBS1113)
【分類號】：R378.21
【正文快照】： 規(guī)律成簇的間隔短回文重復(fù)(clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats,CRISPR)是細(xì)菌內(nèi)存在的專門針對噬菌體及質(zhì)粒等外源基因的獲得性免疫系統(tǒng)[1],這種抗性作用的發(fā)揮類似于真核生物中的RNA干擾作用。在噬菌體治療過程中,細(xì)菌往往會對噬菌體產(chǎn)生耐受,導(dǎo)致耐

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：1479183