發(fā)布時間：2018-01-24 06:22

  本文關鍵詞： 轉基因 膽囊收縮素 飲食　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學》2007年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 膽囊收縮素(Cholecystokinin，CCK)是一種廣泛存在于胃腸道和中樞神經系統(tǒng)的腦腸肽，具有多種生理學功能。腸道中的CCK除了促進膽囊收縮以外，還可以調節(jié)胰酶的分泌和胰腺的生長、胃腸蠕動，抑制胃酸分泌，參與飽腹信號的傳導。作為在腦內含量最豐富的腦腸肽之一，CCK在神經系統(tǒng)內參與了多種生理過程并發(fā)揮著重要的功能，如抑制進食、抗焦慮、鎮(zhèn)痛、調節(jié)血壓和增強記憶等。但是，迄今為止人們對CCK在腦中發(fā)揮作用的具體機制還不清楚；對CCK在腦中的許多功能還存在著很大的爭論，如CCK是否能通過中樞神經系統(tǒng)對動物的飲食實現(xiàn)長期的調節(jié)?CCK是否具有神經保護作用并能增強記憶?CCK與某些神經精神疾病(如Parkinson’s disease、精神分裂癥)的關系也是研究人員力在解決的問題。目前，研究人員對CCK多肽及其受體進行了多方面研究，仍沒有建立CCK轉基因的小鼠。 為了更好的研究CCK在中樞神經系統(tǒng)的功能，本實驗采用神經特異性啟動子PDGF，建立了在神經系統(tǒng)特異性表達CCK的轉基因小鼠并對CCK對小鼠攝食行為和體重的影響進行了初步探討。實驗分為3部分：轉基因表達載體的構建；表達載體在神經母細胞瘤細胞中的表達；轉基因小鼠的鑒定及CCK對飲食調節(jié)的初步探討。 擴增CCK cDNA編碼區(qū)，克隆到含有神經特異性啟動子PDGF的載體里。用表達質粒瞬時轉染人神經母細胞瘤SHSY-5Y細胞，Western Blot顯示構建質粒在體外表達。酶切含有PDGF啟動子、CCK目的片斷、PolyA的片斷進行顯微注射。篩選F_0代轉基因陽性鼠，13只小鼠中3只為陽性。Western Blot顯示CCK在轉基因鼠腦、小腸組織特異性表達。比較3個首建鼠后代與野生鼠腦組織CCK表達量的差異，3個Founder鼠腦中外源CCK都有表達。其中，在兩只(8號、12號)腦中，表達量增加約1倍，在一只(20號)腦內表達量增加約2倍。 將動物分為轉基因組和陰性對照組，并給與正常飲食和高脂飲食。初步動物實驗結果經t檢驗顯示：正常飲食情況下，轉基因雄鼠體重低于陰性對照鼠8.02％(27.61±1.67g vs 30.02±1.04g，，P＜0.05)，轉基因雌鼠低于對照鼠2.36％(21.48±0.41g vs 22.00±1.02g，P=0.364)；高脂飲食情況下，轉基因雌鼠體重低于陰性對照鼠6.55％(21.83±0.54g vs 23.36±1.09g，P＜0.05)，轉基因雄鼠低于對照鼠5.39％(27.56±2.04g vs 29.13±1.47g，P=0.144)。對各組小鼠進食進水量監(jiān)測顯示：給與正常飲食時，CCK降低了雄鼠攝食量，增加雌鼠攝食量；高脂飲食時，CCK增加了小鼠攝食量；對攝水量無顯著影響。分析認為，CCK可能通過調節(jié)小鼠攝食量和物質代謝而降低其體重。實驗結果初步顯示，CCK對小鼠攝食行為有影響，是調節(jié)小鼠攝食和體重的一個重要神經肽。
[Abstract]:Cholecystokinin (CCK) is a kind of brain intestinal peptide widely distributed in the gastrointestinal tract and central nervous system. In addition to promoting gallbladder contraction, CCK can also regulate the secretion of trypsin and pancreatic growth, gastrointestinal peristalsis, and inhibit the secretion of gastric acid. As one of the most abundant brain intestinal peptides in the brain CCK participates in a variety of physiological processes and plays an important role in the nervous system such as inhibition of eating anti-anxiety analgesia. Regulation of blood pressure and enhancement of memory, etc., however, so far, the specific mechanism of the role of CCK in the brain is still unclear. There is much debate about the many functions of CCK in the brain, such as whether CCK can regulate the diet of animals for a long time through the central nervous system. Does CCK have neuroprotective effects and enhance memory? The relationship between CCK and certain neuropsychiatric disorders, such as Parkinson's disease, schizophrenia, is also a problem that researchers are addressing. CCK peptides and their receptors have been studied in many ways, but no CCK transgenic mice have been established. In order to better study the function of CCK in the central nervous system (CNS), the neuro-specific promoter PDGF was used in this study. Transgenic mice expressing CCK specifically in nervous system were established and the effects of CCK on feeding behavior and body weight of mice were preliminarily discussed. The experiment was divided into three parts: construction of transgenic expression vector; Expression of expression vector in neuroblastoma cells; Identification of transgenic mice and preliminary study of dietary regulation by CCK. The coding region of CCK cDNA was amplified and cloned into the vector containing neuro-specific promoter PDGF. Human neuroblastoma SHSY-5Y cells were transiently transfected with the expression plasmid. Western Blot showed that the constructed plasmid was expressed in vitro. The target fragment of PDGF promoter was detected by restriction endonuclease digestion. The PolyA fragments were microinjected. Three of the 13 mice in the F _ (0) generation of transgenic mice were selected. Western Blot showed that CCK was in the transgenic brain. The difference of CCK expression between the three progenies of the first born rat and the wild brain was compared. The expression of CCK was found in the brain of the three Founder mice, two of them (8). (12) in the brain, the expression increased by about 1 fold, and in one brain (20), the expression increased by about 2 times. Animals were divided into transgenic group and negative control group, and were given normal diet and high-fat diet. The body weight of transgenic male mice was lower than that of negative control mice (27.61 鹵1.67g vs 30.02 鹵1.04g, P < 0.05). The transgenic female mice were lower than the control mice (21.48 鹵0.41g vs 22.00 鹵1.02g / kg) and 0.364g / kg respectively. Under the condition of high fat diet, the body weight of transgenic female mice was lower than that of negative control mice (21.83 鹵0.54g vs 23.36 鹵1.09g / g vs 6.55g 鹵0.54g vs 23.36 鹵1.09g / g, P < 0.05). The transgenic male mice were lower than the control mice 5.39% 27.56 鹵2.04g vs 29.13 鹵1.47g. The results showed that CCK decreased the intake of male mice and increased the intake of female mice. CCK increased the food intake of mice during high fat diet. It is believed that CCK may decrease the body weight of mice by regulating their food intake and substance metabolism. The preliminary results showed that CCK had an effect on the feeding behavior of mice. It is an important neuropeptide that regulates food intake and body weight in mice.
【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R-332

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 王維民;;膽囊收縮素(CCK)增強肝膽顯像并測算排泄分數作為膽囊病變的指標[J];國際外科學雜志;1991年03期

2 朱粹青，王光輝，唐祟仁;用原位雜交法研究大鼠腦損傷后膽囊收縮素和腦啡肽mRNA量的變化[J];上海醫(yī)科大學學報;1995年04期

3 張東偉,陳錫美,鄒頌海;胃動素和膽囊收縮素與腸易激綜合征的關系[J];同濟大學學報(醫(yī)學版);2001年05期

4 張罕松;王曙光;聶洪峰;;胃泌素和膽囊收縮素對膽管癌細胞浸潤和轉移的影響[J];消化外科;2006年02期

5 胡秀娥;;膽石癥患者膽囊對膽囊收縮素的敏感性[J];國際消化病雜志;1981年01期

6 尹光耀;;膽囊收縮素總攻排石療法對膽道運動影響的初步觀察[J];中國中西醫(yī)結合雜志;1984年05期

7 丁玄宙;膽囊收縮素的中樞功能[J];生理科學進展;1985年01期

8 James C.Thompson;;膽囊收縮素的若干研究進展[J];生理科學進展;1987年04期

9 魏立民;膽囊收縮素與糖尿病[J];國外醫(yī)學.內分泌學分冊;2003年06期

10 翟秀蘭;郝美金;劉欣;馬杰;付長叢;;膽囊結石與膽囊動力學相關的研究[J];河北醫(yī)科大學學報;2007年01期

相關會議論文 前10條

1 黃熙;任平;張航向;黃裕新;趙保民;;脾氣虛患者膽囊收縮素及其內分泌細胞的變化[A];第七次全國中西醫(yī)結合虛證與老年病學術會議論文摘要集[C];2003年

2 劉慶輝;J銉rg Bungert;James Dovglas Engel;;人A_γ珠蛋白基因增強子功能在轉基因鼠系統(tǒng)的驗證[A];生命科學與生物技術：中國科協(xié)第三屆青年學術年會論文集[C];1998年

3 李靜;陳代文;張克英;丁雪梅;;膽囊收縮素主動免疫對豬內分泌及胰腺功能的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物營養(yǎng)學分會——第九屆學術研討會論文集[C];2004年

4 田道法;何迎春;田甜;;轉基因小鼠不同組織中p53mt和LMP1基因的表達[A];全國中西醫(yī)結合耳鼻咽喉科學術會議論文匯編[C];2005年

5 譚雪梅;陳代文;張克英;丁雪梅;;膽囊收縮素主動免疫及其對豬生產性能和胴體品質的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物營養(yǎng)學分會——第九屆學術研討會論文集[C];2004年

6 袁勇貴;李毅;方群;;老年期抑郁癥與膽囊收縮素的相關性研究[A];中華醫(yī)學會精神病學分會第七屆學術年會論文摘要集[C];2006年

7 時建銓;沈偉;陳俊;陳瑤;仲玲玲;陳勇;朱銀偉;朱海青;張巧全;張穎冬;徐俊;;Infliximab通過增加腦內CD11c+樹突樣細胞降低APP/PS1轉基因鼠腦內的老年斑和tau蛋白異常磷酸化[A];中華醫(yī)學會第十三次全國神經病學學術會議論文匯編[C];2010年

8 任平;張航向;黃熙;李源;黃裕新;趙保民;;脾氣虛證患者血漿和胃竇組織中SS、MOT、CCK的改變[A];全國中醫(yī)藏象研究創(chuàng)新思路學術研討會論文匯編[C];2001年

9 于龍川;熊偉;林小靜;;膽囊收縮素參與嗎啡耐受與成癮的分子機制和最新進展[A];第十二屆全國神經精神藥理學學術交流會論文集[C];2006年

10 占華平;羅忠金;鄔柏林;董葉;;乙肝病毒全基因組轉染鼠的構建及對轉基因鼠的生物學影響[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術會議論文匯編（下冊）[C];2007年

相關重要報紙文章 前10條

1 記者 毛黎;轉基因鼠鼻子特別靈[N];科技日報;2004年

2 玉淑 編譯;用轉基因鼠治療黑色素瘤[N];大眾科技報;2001年

3 華訊;轉基因鼠獻身測試精神藥物[N];醫(yī)藥經濟報;2001年

4 小華;研究老年性黃斑變性轉基因鼠培育成功[N];中國醫(yī)藥報;2007年

5 奇云;聰明基因辨析與爭議[N];大眾科技報;2006年

6 程蓉 本報記者　王春;喝牛奶羊奶將替代打針吃藥[N];科技日報;2006年

7 記者　王翰林;我國轉基因動物乳腺反應器研究獲突破[N];科技日報;2007年

8 倪娜 編譯;大腦機理研究有進展[N];大眾科技報;2000年

9 紀菁;膽道疾病患者為何要忌油膩[N];民族醫(yī)藥報;2006年

10 楊波;膽囊切除后注意什么[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2006年

相關博士學位論文 前10條

1 鄭秀海;膽囊收縮素在膽管癌神經周圍浸潤轉移中的作用及其分子機制[D];第三軍醫(yī)大學;2005年

2 周建獎;膽囊收縮素受體亞型（膽囊收縮素-B/胃泌素受體）基因在人胃癌中的表達及其功能的初步研究[D];四川大學;2004年

3 孫明增;用轉基因鼠模型研究突變apoE基因表達的整體水平效應[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1998年

4 屠亞軍;人類疾病轉基因小鼠模型的建立與應用研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2000年

5 陳燕春;Wnt/β-catenin信號通路在ALS轉基因鼠發(fā)病中作用及其機制的研究[D];山東大學;2012年

6 袁中彪;膽囊收縮素主動免疫對豬的營養(yǎng)生理效應及其機制的研究[D];四川農業(yè)大學;2004年

7 常洋;阿爾茨海默病轉基因動物模型的建立與發(fā)病機理研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2000年

8 夏華強;miR-375過表達引起胰腺損傷的初步研究[D];中南大學;2008年

9 趙占勝;CCK-8對TNF-α誘導大鼠滑膜細胞株RSC-364細胞因子分泌及其信號轉導機制的影響[D];河北醫(yī)科大學;2003年

10 熊良庚;肝硬化與膽囊及VIP、CCK之間關系的初步探討[D];重慶醫(yī)科大學;2004年

相關碩士學位論文 前10條

1 杜靜;PDGF-CCK轉基因小鼠的建立及CCK對攝食行為影響的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2007年

2 張志強;膽囊收縮素在膽源性胰腺炎發(fā)病中的作用[D];中國醫(yī)科大學;2005年

3 李德生;急性脊髓損傷后iNOS表達變化及膽囊收縮素-8肽對其影響[D];河北醫(yī)科大學;2003年

4 張罕松;胃泌素和膽囊收縮素對膽管癌細胞浸潤和轉移的影響[D];第三軍醫(yī)大學;2003年

5 李靜;膽囊收縮素主動免疫對豬內分泌及胰腺功能的影響[D];四川農業(yè)大學;2003年

6 丁雪梅;膽囊收縮素主動免疫產蛋雞的營養(yǎng)生理效應研究[D];四川農業(yè)大學;2003年

7 鄭紡;慢性碘過量對大鼠腦中NSE和CCK基因表達的影響[D];天津醫(yī)科大學;2005年

8 譚雪梅;膽囊收縮素主動免疫及其對豬生產性能和胴體品質的影響[D];四川農業(yè)大學;2003年

9 孟立;CCK對胃腸感覺傳入功能影響的外周及中樞機理研究[D];重慶醫(yī)科大學;2004年

10 梁莉莉;功能性消化不良患者胃粘膜中膽囊收縮素和P物質的變化及其臨床意義[D];大連醫(yī)科大學;2007年

本文編號：1459379