本文關(guān)鍵詞： 轉(zhuǎn)基因 膽囊收縮素 飲食　出處：《中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 膽囊收縮素(Cholecystokinin，CCK)是一種廣泛存在于胃腸道和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的腦腸肽，具有多種生理學(xué)功能。腸道中的CCK除了促進(jìn)膽囊收縮以外，還可以調(diào)節(jié)胰酶的分泌和胰腺的生長(zhǎng)、胃腸蠕動(dòng)，抑制胃酸分泌，參與飽腹信號(hào)的傳導(dǎo)。作為在腦內(nèi)含量最豐富的腦腸肽之一，CCK在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)參與了多種生理過程并發(fā)揮著重要的功能，如抑制進(jìn)食、抗焦慮、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)血壓和增強(qiáng)記憶等。但是，迄今為止人們對(duì)CCK在腦中發(fā)揮作用的具體機(jī)制還不清楚；對(duì)CCK在腦中的許多功能還存在著很大的爭(zhēng)論，如CCK是否能通過中樞神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)動(dòng)物的飲食實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期的調(diào)節(jié)?CCK是否具有神經(jīng)保護(hù)作用并能增強(qiáng)記憶?CCK與某些神經(jīng)精神疾病(如Parkinson’s disease、精神分裂癥)的關(guān)系也是研究人員力在解決的問題。目前，研究人員對(duì)CCK多肽及其受體進(jìn)行了多方面研究，仍沒有建立CCK轉(zhuǎn)基因的小鼠。 為了更好的研究CCK在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能，本實(shí)驗(yàn)采用神經(jīng)特異性啟動(dòng)子PDGF，建立了在神經(jīng)系統(tǒng)特異性表達(dá)CCK的轉(zhuǎn)基因小鼠并對(duì)CCK對(duì)小鼠攝食行為和體重的影響進(jìn)行了初步探討。實(shí)驗(yàn)分為3部分：轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體的構(gòu)建；表達(dá)載體在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中的表達(dá)；轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定及CCK對(duì)飲食調(diào)節(jié)的初步探討。 擴(kuò)增CCK cDNA編碼區(qū)，克隆到含有神經(jīng)特異性啟動(dòng)子PDGF的載體里。用表達(dá)質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SHSY-5Y細(xì)胞，Western Blot顯示構(gòu)建質(zhì)粒在體外表達(dá)。酶切含有PDGF啟動(dòng)子、CCK目的片斷、PolyA的片斷進(jìn)行顯微注射。篩選F_0代轉(zhuǎn)基因陽性鼠，13只小鼠中3只為陽性。Western Blot顯示CCK在轉(zhuǎn)基因鼠腦、小腸組織特異性表達(dá)。比較3個(gè)首建鼠后代與野生鼠腦組織CCK表達(dá)量的差異，3個(gè)Founder鼠腦中外源CCK都有表達(dá)。其中，在兩只(8號(hào)、12號(hào))腦中，表達(dá)量增加約1倍，在一只(20號(hào))腦內(nèi)表達(dá)量增加約2倍。 將動(dòng)物分為轉(zhuǎn)基因組和陰性對(duì)照組，并給與正常飲食和高脂飲食。初步動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)t檢驗(yàn)顯示：正常飲食情況下，轉(zhuǎn)基因雄鼠體重低于陰性對(duì)照鼠8.02％(27.61±1.67g vs 30.02±1.04g，，P＜0.05)，轉(zhuǎn)基因雌鼠低于對(duì)照鼠2.36％(21.48±0.41g vs 22.00±1.02g，P=0.364)；高脂飲食情況下，轉(zhuǎn)基因雌鼠體重低于陰性對(duì)照鼠6.55％(21.83±0.54g vs 23.36±1.09g，P＜0.05)，轉(zhuǎn)基因雄鼠低于對(duì)照鼠5.39％(27.56±2.04g vs 29.13±1.47g，P=0.144)。對(duì)各組小鼠進(jìn)食進(jìn)水量監(jiān)測(cè)顯示：給與正常飲食時(shí)，CCK降低了雄鼠攝食量，增加雌鼠攝食量；高脂飲食時(shí)，CCK增加了小鼠攝食量；對(duì)攝水量無顯著影響。分析認(rèn)為，CCK可能通過調(diào)節(jié)小鼠攝食量和物質(zhì)代謝而降低其體重。實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步顯示，CCK對(duì)小鼠攝食行為有影響，是調(diào)節(jié)小鼠攝食和體重的一個(gè)重要神經(jīng)肽。
[Abstract]:Cholecystokinin (CCK) is a kind of brain intestinal peptide widely distributed in the gastrointestinal tract and central nervous system. In addition to promoting gallbladder contraction, CCK can also regulate the secretion of trypsin and pancreatic growth, gastrointestinal peristalsis, and inhibit the secretion of gastric acid. As one of the most abundant brain intestinal peptides in the brain CCK participates in a variety of physiological processes and plays an important role in the nervous system such as inhibition of eating anti-anxiety analgesia. Regulation of blood pressure and enhancement of memory, etc., however, so far, the specific mechanism of the role of CCK in the brain is still unclear. There is much debate about the many functions of CCK in the brain, such as whether CCK can regulate the diet of animals for a long time through the central nervous system. Does CCK have neuroprotective effects and enhance memory? The relationship between CCK and certain neuropsychiatric disorders, such as Parkinson's disease, schizophrenia, is also a problem that researchers are addressing. CCK peptides and their receptors have been studied in many ways, but no CCK transgenic mice have been established. In order to better study the function of CCK in the central nervous system (CNS), the neuro-specific promoter PDGF was used in this study. Transgenic mice expressing CCK specifically in nervous system were established and the effects of CCK on feeding behavior and body weight of mice were preliminarily discussed. The experiment was divided into three parts: construction of transgenic expression vector; Expression of expression vector in neuroblastoma cells; Identification of transgenic mice and preliminary study of dietary regulation by CCK. The coding region of CCK cDNA was amplified and cloned into the vector containing neuro-specific promoter PDGF. Human neuroblastoma SHSY-5Y cells were transiently transfected with the expression plasmid. Western Blot showed that the constructed plasmid was expressed in vitro. The target fragment of PDGF promoter was detected by restriction endonuclease digestion. The PolyA fragments were microinjected. Three of the 13 mice in the F _ (0) generation of transgenic mice were selected. Western Blot showed that CCK was in the transgenic brain. The difference of CCK expression between the three progenies of the first born rat and the wild brain was compared. The expression of CCK was found in the brain of the three Founder mice, two of them (8). (12) in the brain, the expression increased by about 1 fold, and in one brain (20), the expression increased by about 2 times. Animals were divided into transgenic group and negative control group, and were given normal diet and high-fat diet. The body weight of transgenic male mice was lower than that of negative control mice (27.61 鹵1.67g vs 30.02 鹵1.04g, P < 0.05). The transgenic female mice were lower than the control mice (21.48 鹵0.41g vs 22.00 鹵1.02g / kg) and 0.364g / kg respectively. Under the condition of high fat diet, the body weight of transgenic female mice was lower than that of negative control mice (21.83 鹵0.54g vs 23.36 鹵1.09g / g vs 6.55g 鹵0.54g vs 23.36 鹵1.09g / g, P < 0.05). The transgenic male mice were lower than the control mice 5.39% 27.56 鹵2.04g vs 29.13 鹵1.47g. The results showed that CCK decreased the intake of male mice and increased the intake of female mice. CCK increased the food intake of mice during high fat diet. It is believed that CCK may decrease the body weight of mice by regulating their food intake and substance metabolism. The preliminary results showed that CCK had an effect on the feeding behavior of mice. It is an important neuropeptide that regulates food intake and body weight in mice.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R-332

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