本文關(guān)鍵詞： 人骨髓間充質(zhì)干細胞 單克隆抗體 間接免疫熒光 免疫組織化學法 免疫磁珠分選　出處：《浙江大學》2006年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：人骨髓間充質(zhì)干細胞(human Mesenchymal Stem Cells,hMSCs)是存在于骨髓中具有高度自我更新和多向分化潛能的干細胞群體,是近年來干細胞研究領(lǐng)域的一個熱點。hMSCs是組織工程和再生醫(yī)學的理想種子細胞,在臨床具有廣闊的應(yīng)用前景。 近十年來干細胞生物學研究領(lǐng)域的突破,使人們對hMSCs的生物學特性有了較深入的認識,但迄今為止尚未發(fā)現(xiàn)其特異表面膜標志,現(xiàn)行的分離方法主要是根據(jù)hMSCs的生長特性、表型特征和所具有的多向分化潛能進行評判,影響因素多,操作繁瑣,費用昂貴,所得細胞均一性尚不理想,且不同實驗室之間數(shù)據(jù)的可比性差。因而人們一直在努力尋找特異的hMSCs的標記分子。 本研究以分離培養(yǎng)的hMSCs免疫BALB/C小鼠,采用雜交瘤技術(shù)制備抗hMSCs的單克隆抗體,并通過間接免疫熒光、免疫組織化學及流式細胞術(shù)等方法對其生物學特性作了初步的鑒定,并以制備的單克隆抗體作探針,用于hMSCs的分選及表面特異性膜分子研究。 實驗方法 1.hMSCs的分離培養(yǎng)與鑒定:從正常健康供者獲取骨髓,以Ficoll-paque分離液分離獲取單個核細胞層經(jīng)培養(yǎng)后,棄去非貼壁細胞,以10%胎牛血清的
[Abstract]:Human Mesenchymal Stem Cells. HMSCs is a stem cell population with high self-renewal and multi-differentiation potential in bone marrow. In recent years, hMSCs are the ideal seed cells in tissue engineering and regenerative medicine, and have a wide application prospect in clinic. The breakthrough in the field of stem cell biology in the past decade has made people have a deeper understanding of the biological characteristics of hMSCs, but so far no specific surface membrane markers have been found. The current separation methods are mainly based on the growth characteristics, phenotypic characteristics and multidirectional differentiation potential of hMSCs. There are many influencing factors, complicated operation and high cost. The homogeneity of the obtained cells is not ideal, and the comparability of the data between different laboratories is not good. Therefore, people have been trying to find the marker molecules of specific hMSCs. In this study, BALB/C mice were immunized with hMSCs. Monoclonal antibodies against hMSCs were prepared by hybridoma technique, and indirect immunofluorescence was used. The biological characteristics of hMSCs were preliminarily identified by immunohistochemistry and flow cytometry. The prepared monoclonal antibodies were used as probes for the separation of hMSCs and the study of surface specific membrane molecules. Experimental method 1. Isolation, culture and identification of hMSCs: bone marrow was obtained from healthy donors, mononuclear cell layer was isolated from normal donor and mononuclear cell layer was isolated by Ficoll-paque, and non-adherent cells were discarded. With 10% fetal bovine serum
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R392

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本文編號：1458020