本文關鍵詞： 人乳頭瘤病毒 表達載體 基因轉染 基因表達　出處：《暨南大學》2006年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的 構建尖銳濕疣患者人乳頭瘤病毒6b型晚期基因L1(HPV6bL1)的真核表達質粒，并使其在真核細胞內表達，為進一步研究人類乳頭瘤病毒(HPV)L1蛋白生物學特性和L1蛋白疫苗研究奠定基礎。 方法 應用PCR技術擴增原核重組質粒PQE40-HPV6b L1中L1基因，經(jīng)雙酶切純化后與經(jīng)過相同酶切的真核表達質粒PEGFP-C1連接，熱沖擊入感受態(tài)大腸桿菌DH5a，經(jīng)擴增后酶切鑒定，挑選陽性克隆進行測序。重組質粒PEGFP-HPV6bL1應用脂質體轉染技術將其轉染進COS-7細胞，熒光顯微鏡下觀察融合蛋白的表達，RT-PCR檢測HPV6bL1mRNA的生成。 結果 通過雙酶切及測序鑒定，重組質粒中插入的目的基因片斷及載體DNA大小、方向和插入位點均正確，PEGFP-HPV6bL1構建成功。重組體成功轉染進COS-7細胞，在熒光倒置顯微鏡下可觀察到細胞內有綠色熒光蛋白的表達。并進一步進行RT-PCR，檢測到HPV6bL1mRNA的生成。 結論 攜帶HPV6bL1的重組體PEGFP-HPV6bL1成功構建，并轉染進真核細胞。質粒載體PEGFP帶有綠色熒光基因，，便于觀察融合蛋白PEGFP-HPV6bL1在真核COS-7細胞內表達。該研究成果可望進一步用于研究尖銳濕疣基因L1蛋白的生物學特性和進行防治疫苗的基因工程研究。
[Abstract]:Objective to construct the eukaryotic expression plasmid of human papillomavirus 6b (HPV6bL1) gene from patients with condyloma acuminatum and express it in eukaryotic cells. It provides a basis for further study on the biological characteristics of HPV-L1 protein and L1 protein vaccine of human papillomavirus. Methods the L1 gene of prokaryotic recombinant plasmid PQE40-HPV6b L1 was amplified by PCR. After being digested by double enzyme, the recombinant plasmid was ligated with the eukaryotic expression plasmid PEGFP-C1 which was digested by the same enzyme. The recombinant plasmid PEGFP-HPV6bL1 was transfected into COS-7 cells by liposome transfection and the expression of fusion protein was observed under fluorescence microscope. RT-PCR detects the generation of HPV6bL1mRNA. Results by double enzyme digestion and sequencing, the inserted target gene fragment and vector DNA size, direction and insertion site of the recombinant plasmid were correct. PEGFP-HPV6bL1 was successfully constructed. The recombinant was successfully transfected into COS-7 cells. The expression of green fluorescent protein was observed under fluorescence inverted microscope, and the formation of HPV6bL1mRNA was detected by RT-PCR. Conclusion the recombinant PEGFP-HPV6bL1 carrying HPV6bL1 was successfully constructed and transfected into eukaryotic cells. The plasmid PEGFP contains green fluorescent gene. It is convenient to observe the expression of fusion protein PEGFP-HPV6bL1 in eukaryotic COS-7 cells. This study is expected to be further used to study the biological characteristics and control of L1 protein of condyloma acuminatum gene. Genetic engineering of vaccines.
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R373;R346

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