本文關(guān)鍵詞： 噬菌體抗體庫(kù) Loxp-cre重組系統(tǒng) 單鏈抗體　出處：《中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志》2004年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的　構(gòu)建大容量噬菌體單鏈抗體庫(kù) ,從中篩選人源單鏈抗體 (ScFv)。方法　從正常成人外周血和新生兒臍血分離淋巴細(xì)胞 ,用RT PCR擴(kuò)增輕鏈可變區(qū)基因 (VL)和重鏈可變區(qū)基因(VH) ,通過(guò)重疊PCR法將VH 和VL 拼接形成ScFv基因 ,并克隆入噬菌體表達(dá)載體PDF ,得到ScFv初級(jí)噬菌體抗體庫(kù)。以高M(jìn)OI超感染cre+ 菌株BS136 5 ,通過(guò)loxp cre定位重組系統(tǒng) ,介導(dǎo)輕重鏈的組合配對(duì) ,得到大容量抗體庫(kù) ,用多種抗原對(duì)抗體庫(kù)進(jìn)行生物淘篩 ,鑒定抗體庫(kù)的性能。結(jié)果　獲得了 6×10 10 的大容量單鏈?zhǔn)删w抗體庫(kù)。分別用卵清蛋白、胃蛋白酶、鐵蛋白、人角蛋白、人TNF
[Abstract]:Objective to construct a large phage phage scFV library and screen human scFv.Methods lymphocytes were isolated from normal adult peripheral blood and umbilical cord blood of newborn. The light chain variable region gene (VLV) and the heavy chain variable region gene (VH) were amplified by RT PCR. VH and VL were spliced to form ScFv gene by overlapping PCR. The ScFv primary phage antibody library was cloned into the phage expression vector PDF, and the cre strain BS136 5 was superinfected with high MOI. Through the loxp cre localization recombination system, the combination pairing of light and light chains was mediated, and the large volume antibody library was obtained, and the antibody library was screened with a variety of antigens. Results A large volume single-chain phage antibody library of 6 脳 10 10 was obtained. Ovalbumin, pepsin, ferritin, human keratin and human TNF were used respectively.
【作者單位】： 解放軍海軍總醫(yī)院 解放軍海軍總醫(yī)院 解放軍海軍總醫(yī)院 解放軍海軍總醫(yī)院 解放軍海軍總醫(yī)院
【基金】：解放軍醫(yī)藥衛(wèi)生“十五”重點(diǎn)項(xiàng)目資助課題 ( 0 1Z0 15 )
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 目前 ,噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)成為人源單抗研制的重要途徑 ,已經(jīng)證實(shí) ,從大容量抗體庫(kù)可以不經(jīng)免疫(by passingimmunization)獲得任何特異性的人源單抗〔1〕,成為研制人源抗體的有效可靠手段。構(gòu)建大容量抗體庫(kù)的最大限制因素是細(xì)菌的轉(zhuǎn)化效率較低 ,很難達(dá)到高容量的抗體庫(kù)。反復(fù)

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 俞曉峰，王海濤，，黃策;人抗E．coliJ5噬菌體抗體制備的初步研究[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;1996年03期

2 萬(wàn)澤生,王海濤,姜紹諄;從構(gòu)建的噬菌體抗體庫(kù)中篩選抗甲肝人單抗[J];生物工程學(xué)報(bào);1998年03期

3 王琰,王雅明,劉群英,徐建軍,李全喜,陳宇萍,王力民,李競(jìng);從噬菌體抗體庫(kù)克隆抗人RBC單鏈抗體基因[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;1998年01期

4 王琰,劉群英,化冰,高榮凱,陳宇萍,朱迎春;從人源性噬菌體抗體庫(kù)分離出1株含有異常序列的抗HBsAg Fab克隆[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;1998年02期

5 王素莉,陳昆明,田恩江,陳祖培;抗甲狀腺刺激性免疫球蛋白單鏈抗體噬菌體抗體庫(kù)的初建[J];中國(guó)地方病防治雜志;1999年05期

6 王剛,化冰,王琰,劉玉峰;從半合成噬菌體抗體庫(kù)篩選抗角蛋白人抗體[J];海軍總醫(yī)院學(xué)報(bào);1999年04期

7 袁斌,何君,周育森,劉懷田,俞曉峰,王慧,黃策;從混合的噬菌體抗體庫(kù)中直接篩選高親和性的抗腫瘤壞死因子-α人源單克隆抗體[J];生物技術(shù)通訊;1999年04期

8 肖天利,劉為紋,房殿春;噬菌體抗體庫(kù)的構(gòu)建及抗AFP人單抗的篩選[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年07期

9 閻巖,白文濤,徐志凱,羅雯,張芳琳,吳興安,劉勇,王海濤;重鏈可變區(qū)基因隨機(jī)CDR3 ScFv噬菌體抗體庫(kù)的構(gòu)建及篩選[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2000年02期

10 張建瓊,張雪萍,謝維,林陵,單祥年,王琰;人源抗丙型肝炎病毒噬菌體抗體庫(kù)的構(gòu)建及篩選[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2000年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王志毅;劉杞;萬(wàn)澤生;張定鳳;;從人源性噬菌體抗體庫(kù)中篩選人抗HBsAg的Fab噬菌體抗體(摘要)[A];第九次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2000年

2 王剛;劉玉峰;王琰;;人源性抗角蛋自抗體的基因克隆、表達(dá)及親和力成熟[A];西部大開(kāi)發(fā) 科教先行與可持續(xù)發(fā)展——中國(guó)科協(xié)2000年學(xué)術(shù)年會(huì)文集[C];2000年

3 朱建高;李躍輝;胡錦躍;李官成;周國(guó)華;李小玲;孫去病;;用EBV轉(zhuǎn)化的大腸癌患者B細(xì)胞構(gòu)建噬菌體抗體庫(kù)[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

4 王剛;王琰;化冰;劉玉峰;;基因工程抗角蛋白人抗體的制備與鑒定[A];2001年中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

5 李承新;劉玉峰;李春英;萬(wàn)業(yè)宏;王剛;;基因工程技術(shù)制備人源性抗48kD角蛋白抗體Fab片段[A];2001年中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

6 鐘彥偉;成軍;施雙雙;劉妍;夏小兵;王剛;陳菊梅;;丙型肝炎病毒包膜蛋白E2人源單鏈可變區(qū)抗體的篩選與鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)感染病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

7 劉德新;李小鷹;陳瑞晗;郝好杰;;Cu~(2+)金屬螯合層析法純化及復(fù)性人抗地高辛單鏈抗體[A];國(guó)際心臟研究會(huì)（ISHR）中國(guó)分會(huì)第七屆學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)心血管專業(yè)委員會(huì)第十屆學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2002年

8 王剛;劉玉峰;;人天然抗體庫(kù)的構(gòu)建及抗角蛋白抗體的篩選[A];2002中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

9 薛峰;鄭捷;潘萌;李衛(wèi)平;;鼠抗天皰瘡抗原(PVA)單鏈抗體的構(gòu)建與篩選[A];2002中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

10 盧寧;王剛;劉玉峰;李巍;張海龍;趙小東;夏汝山;;基因工程抗角蛋白抗體在正常皮膚和幾種表皮增生性皮膚病皮損中的反應(yīng)定位[A];2003中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王彥剛;人源性膠質(zhì)瘤噬菌體抗體庫(kù)的構(gòu)建及初步篩選[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

2 周麗君;CDR3導(dǎo)向抗體庫(kù)技術(shù)人源化抗膀胱癌單抗BDI[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

3 李金菊;血管內(nèi)皮細(xì)胞的膜蛋白與乙酰膽堿靶標(biāo)的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

4 葛曉冬;脂多糖結(jié)合蛋白的分離、純化及其噬菌體抗體篩選[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2003年

5 祝懷平;von Willebrand因子功能結(jié)構(gòu)域研究及其A1區(qū)基因工程抗體制備[D];蘇州大學(xué);2003年

6 冀學(xué)斌;人源化抗血小板膜糖蛋白GPⅡ b/Ⅲa單鏈?zhǔn)删w抗體的研究[D];山東大學(xué);2005年

7 劉晶;抗CD3改型單鏈抗體的分子定向進(jìn)化[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

8 朱進(jìn);抗Met基因工程抗體的親和力成熟與特性研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

9 吳興安;人源性抗HFRS病毒抗體基因的獲得及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1999年

10 王剛;人源性抗角蛋白抗體的基因克隆、表達(dá)及親和力成熟[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2000年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 侯云霞;抗惡性瘧原蟲(chóng)HRP-II單鏈抗體庫(kù)的構(gòu)建、篩選[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2001年

2 蘇明;人源性天然單鏈抗體庫(kù)的構(gòu)建[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

3 何小鵑;鼻咽癌人源抗獨(dú)特型抗體的制備及篩選[D];中南大學(xué);2003年

4 趙禹;人TRAb噬菌體抗體庫(kù)的初建[D];天津醫(yī)科大學(xué);2003年

5 陳永鋒;人源性噬菌體抗體庫(kù)中抗CEA抗體的篩選與初步鑒定[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2002年

6 陳新華;抗細(xì)粒棘球蚴人工重組B抗原人源單鏈可變區(qū)抗體的篩選、鑒定和表達(dá)[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2003年

7 秦琴;人源性抗乙型肝炎表面抗原（抗HBs）噬菌體單鏈抗體庫(kù)的構(gòu)建[D];山西醫(yī)科大學(xué);2003年

8 丁貴鵬;全人源抗MAGE-A1單鏈抗體的篩選及免疫活性鑒定[D];南京醫(yī)科大學(xué);2005年

9 喬媛媛;大容量噬菌體抗體庫(kù)的構(gòu)建及鑒定[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

10 段麗君;人TRAb單鏈組合文庫(kù)的構(gòu)建[D];天津醫(yī)科大學(xué);2005年

本文編號(hào)：1446760