本文關(guān)鍵詞：鼠疫耶爾森氏菌與小鼠巨噬細(xì)胞蛋白相互作用的研究　出處：《中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2005年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：鼠疫耶爾森氏菌是鼠疫的病原體,曾引發(fā)三次鼠疫世界大流行。鼠疫菌與宿主巨噬細(xì)胞的相互作用是其致病機(jī)制的重要環(huán)節(jié)。本研究試圖通過(guò)研究鼠疫耶爾森氏菌與巨噬細(xì)胞之間的蛋白相互作用進(jìn)一步深入了解鼠疫菌的致病機(jī)制。我們首先建立和優(yōu)化了蛋白芯片篩選鼠疫菌與巨噬細(xì)胞相互作用的方法,用包含149個(gè)鼠疫菌毒力相關(guān)蛋白的蛋白芯片篩選出17個(gè)能與巨噬細(xì)胞蛋白相互作用的鼠疫菌蛋白。其中除LcrG、YscW和YscB為鼠疫菌重要毒力因子低鈣響應(yīng)元件的成員、katY為過(guò)氧化物歧化酶外,其余蛋白為推測(cè)的原噬菌體基因編碼蛋白或推測(cè)的未知功能蛋白。間接免疫熒光結(jié)果顯示8個(gè)芯片反應(yīng)中信號(hào)最強(qiáng)的蛋白LcrG,YscB,Yscw,YpPCP1.06,YpMT1.25ac,YpMT1.24c,YP02090,YP02108均能與巨噬細(xì)胞相互作用,初步證實(shí)篩選結(jié)果比較可靠性。利用噬菌體重組技術(shù)構(gòu)建相應(yīng)蛋白表達(dá)缺陷的鼠疫菌突變株,分析突變株對(duì)巨噬細(xì)胞的細(xì)胞毒性和在BALB/c小鼠中的LD_(50),發(fā)現(xiàn)兩者的突變株在小鼠模型中的毒力顯著下降,表明鼠疫菌LcrG和YscB蛋白在其致病機(jī)制中有非常重要的作用。利用細(xì)菌雙雜交技術(shù)以鼠疫菌LcrG和Yscw蛋白為誘餌蛋白篩選巨噬細(xì)胞J774A.1的cDNA文庫(kù),發(fā)現(xiàn)LcrG在巨噬細(xì)胞內(nèi)作用的靶蛋白為Rp139和Txn2,YscW作用的靶蛋白為Rnf149。Trx-2和Rnf149分別為硫氧還原蛋白和RING結(jié)構(gòu)泛素連接酶相關(guān)的蛋白,它們?cè)诩?xì)胞的正常生理活動(dòng)中發(fā)揮重要的作用,與細(xì)胞的免疫響應(yīng)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等緊密相關(guān)。我們將繼續(xù)深入研究這些蛋白相互作用,揭示它們?cè)谑笠呔虏C(jī)制中發(fā)揮的作用。本研究首次將蛋白芯片用于篩選細(xì)菌與宿主之間的蛋白相互作用的研究,并篩選出一些與鼠疫菌毒力相關(guān)的靶標(biāo)蛋白,發(fā)現(xiàn)LcrG和YscW在巨噬細(xì)胞內(nèi)作用的靶蛋白,為揭示鼠疫菌與宿主間相互作用的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Yersinia pestis is the pathogen of plague. The interaction between Yersinia pestis and host macrophages is an important part of its pathogenic mechanism. This study attempts to study the protein interaction between Yersinia pestis and macrophages. We first established and optimized a protein chip screening method for the interaction between Yersinia pestis and macrophages. Seventeen Yersinia pestis proteins that interact with macrophage proteins were screened by using a protein chip containing 149 virulence related proteins of Yersinia pestis, except LcrG. YscW and YscB were members of low calcium response element of Yersinia pestis. The other proteins were speculated phage gene encoding proteins or unknown functional proteins. Indirect immunofluorescence results showed that the most signalling protein of the eight chip reactions was LcrGGN YscBU Yscw. YpPCP1. 06 and YpMT1. 25acl. YpMT1. 24cCU YP02090 YP02108 can interact with macrophages. The screening results were confirmed to be more reliable. A mutant strain of Yersinia pestis with protein expression deficiency was constructed by phage recombination technique. By analyzing the cytotoxicity of mutants to macrophages and LDS-50 in BALB/c mice, we found that the virulence of the mutants was significantly decreased in mice. The results indicate that the LcrG and YscB proteins of Yersinia pestis play an important role in the pathogenesis of Yersinia pestis. Using bacterial Two-hybrid technique to screen macrophages J77 with Yersinia pestis LcrG and Yscw proteins as bait proteins. 4A.1 cDNA library. It was found that the target proteins of LcrG in macrophages were Rp139 and Txn2. The target proteins of YscW were Rnf149.Trx-2 and Rnf149, which were thioxy-reducing proteins and RING structure ubiquitin ligase related proteins, respectively. They play an important role in the normal physiological activities of cells and are closely related to the cellular immune response and signal transduction. We will continue to study these protein interactions in depth. In order to reveal their role in the pathogenesis of Yersinia pestis, protein microarray was used to screen the protein interaction between bacteria and host for the first time. Some target proteins related to the virulence of Yersinia pestis were screened, and the target proteins of LcrG and YscW acting on macrophages were found, which laid a foundation for the mechanism of interaction between Yersinia pestis and its host.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類(lèi)號(hào)】：R378

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1434541