本文關(guān)鍵詞：抗HIV-1單鏈抗體重組白喉毒素的構(gòu)建與表達(dá)研究　出處：《長春理工大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：重組免疫毒素被稱為“生物導(dǎo)彈”，是目前腫瘤、自身免疫性疾病以及移植排斥等免疫治療領(lǐng)域的熱點(diǎn)研究方向之一。對(duì)于AIDS而言，由于免疫毒素能夠特異性的殺傷HIV潛伏感染細(xì)胞，徹底摧毀病毒儲(chǔ)存池，而對(duì)正常細(xì)胞毒性很低，從而成為當(dāng)前HAART輔助治療的亮點(diǎn)。 為了獲得針對(duì)HIV-1的無毒副作用且能根除體內(nèi)病毒的藥物，進(jìn)行了重組免疫毒素的表達(dá)，期望其針對(duì)HIV病毒和感染細(xì)胞的特異殺傷作用可以最終實(shí)現(xiàn)抗病毒這一治療目的。 將獲得的單鏈抗體(ScFv)基因分別代替白喉毒素DT的受體結(jié)合區(qū)以及白喉毒素DT的受體結(jié)合區(qū)和跨膜區(qū)，制備出重組毒素基因DT-ScFv，利用原核表達(dá)載體pET28a，構(gòu)建了用于表達(dá)重組毒素的原核表達(dá)質(zhì)粒pET-DT-hS120、pET-DTA-hS120，上述質(zhì)粒轉(zhuǎn)化受體菌BL21(DE3)后，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，成功地表達(dá)了目的蛋白，表達(dá)量分別為21％，23％，，并利用Ni-NTA金屬螯合層析法對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了純化及復(fù)性處理。
[Abstract]:Recombinant immunotoxin called "biological missile", is currently a hot research direction of tumor, autoimmune diseases and transplant rejection and other immune therapeutic areas. For AIDS, because the immune cell specific toxins can kill HIV virus latent infection, completely destroyed the storage tank and low toxicity to normal cells. In order to become the HAART adjuvant therapy highlights.
In order to get rid of the toxic side effects of HIV-1 and eradicate the virus in vivo, the expression of recombinant immunotoxin is carried out. It is hoped that its specific killing effect against HIV virus and infected cells can finally achieve the purpose of antiviral treatment.
The single chain antibody (ScFv) gene instead of diphtheria toxin DT receptor binding and receptor DT of diphtheria toxin binding region and transmembrane region, prepared recombinant toxin DT-ScFv gene, prokaryotic expression vector pET28a for expression of recombinant toxin, the prokaryotic expression vector pET-DT-hS120 pET-DTA-hS120 was constructed. The plasmid was transformed into recipient BL21 (DE3), induced by IPTG, the successful expression of the target protein, the expression level was 21%, 23% respectively, and the expression products were purified and renatured by Ni-NTA metal chelate affinity chromatography.

【學(xué)位授予單位】：長春理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1428863