本文關(guān)鍵詞：內(nèi)源性一氧化碳對(duì)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖及凋亡基因表達(dá)譜的影響　出處：《四川大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的運(yùn)用芯片技術(shù)研究經(jīng)PDGF和內(nèi)源性CO短時(shí)間刺激后，血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)增殖及凋亡相關(guān)基因表達(dá)譜的變化，，推測(cè)可能的作用機(jī)制，為肺動(dòng)脈高壓的深入研究提供基礎(chǔ)。 方法雄性SD大鼠麻醉后，取肺動(dòng)脈血管進(jìn)行離體培養(yǎng)。經(jīng)形態(tài)學(xué)及α-actin免疫組化染色證實(shí)為平滑肌細(xì)胞。將細(xì)胞隨機(jī)分為3組，每組5板細(xì)胞，Ⅰ組即對(duì)照組；Ⅱ組即PDGF刺激組，PDGF濃度為20ng／ml；Ⅲ組即Hemin刺激組，培養(yǎng)基中含20ng／ml PDGF及20μmol／L Hemin，于加藥2小時(shí)后收集細(xì)胞，提取總RNA，定量并進(jìn)行純化，后將RNA逆轉(zhuǎn)錄為CDNA，并將其在體外轉(zhuǎn)錄為帶有生物素標(biāo)記的CRNA，再次進(jìn)行定量和純化，后進(jìn)行雜交、洗脫、染色、掃描及數(shù)據(jù)處理。 結(jié)果Ⅱ組與Ⅰ組相比，在45102條基因中差異表達(dá)基因有657條，其中上條338條，下調(diào)319條，與增殖相關(guān)的差異表達(dá)基因47條，與凋亡相關(guān)的差異表達(dá)基因8條。其中與促進(jìn)增殖及抑制凋亡相關(guān)的基因如：CyclinD、CyclinH1、CyclinL1、MAP2K3(P38)、Mybl1、Junb、Jun、Kras、Nras、VEGF-α、FGF-α、PDGF-α、Rags、Rbm7、Socs、及Bzwl、Eif4e等表達(dá)顯著上調(diào)，而抑制增殖和促進(jìn)凋亡的基因如：P27、Nek2、Gadd45α、Macf1、Trp53inp1、Parc等則表達(dá)顯著下調(diào)。Ⅲ組與Ⅱ組相比，在45102條基因中差異表達(dá)基因有366條，與增殖相關(guān)的差異表達(dá)基因21條，與凋亡相關(guān)的差異表達(dá)基因15條。其中與促增殖和抗凋亡相關(guān)的基因如：MAP2K3(P38)、CyclinD1、CyclinG1、GOS2、TGFb3、PDGF-α、IGF1、MybL1、anapc10、Faim、Pik3r1等表達(dá)顯著下調(diào)，而與抑制增殖和促進(jìn)凋亡相關(guān)的基因如：Gadd45α、P21、Sens2、Trp53inp1、sqstm1、Ern1等則表達(dá)顯著上調(diào)。Hemin刺激組與對(duì)照組相比抑制增殖和促進(jìn)凋亡的基因如：P21、Gadd45α、Trp53inp1、sqstm1、Ccar1等則顯著上調(diào)表達(dá)。 結(jié)論推測(cè)PDGF短時(shí)間刺激肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞后，可能引起Map2k3(P38)信號(hào)通路短時(shí)間激活，同時(shí)促進(jìn)一系列生長因子，癌基因，細(xì)胞周期素的表達(dá)而引發(fā)了肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖。內(nèi)源性CO引起肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖抑制，除了P21和一系列細(xì)胞周期素，可能也有Map2k3(P38)信號(hào)通路的參與。另外推測(cè)內(nèi)源性CO可能通過P53依賴途徑引發(fā)了細(xì)胞凋亡，但其中可能有Caspases家族及Gadd45α等的參與。提示肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖和凋亡過程是多途徑多基因參與的復(fù)雜過程，芯片顯示的結(jié)果為進(jìn)一步研究提供了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to investigate the changes of proliferation and apoptosis-related gene expression profiles in vascular smooth muscle cells stimulated by PDGF and endogenous CO for a short time, and to speculate the possible mechanism. To provide the basis for the further study of pulmonary hypertension. Methods male SD rats were anesthetized and cultured in vitro. The cells were identified as smooth muscle cells by morphological and 偽 -actin immunohistochemical staining. The cells were randomly divided into 3 groups with 5 plate cells in each group. Group 鈪

本文編號(hào)：1408802