本文關(guān)鍵詞：負(fù)載供者PUVA脾細(xì)胞的受者未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞對(duì)移植免疫調(diào)節(jié)的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院》2007年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的：1、建立大鼠腹部異位心臟移植模型及原位肝臟移植模型；2、建立體外培養(yǎng)、擴(kuò)增大鼠骨髓源性未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞(immature dendritic cells，imDc)的方法；3、建立補(bǔ)骨脂素聯(lián)合長(zhǎng)波紫外線照射(PUVA)誘導(dǎo)大鼠脾細(xì)胞凋亡的方法，觀察imDC吞噬同種PUVA脾細(xì)胞(PUVA-SP)的能力以及吞噬后DC生物免疫學(xué)特性的變化；4、觀察移植術(shù)前輸注負(fù)載供者PUVA-SP的受者imDC(PUVA-SP-DC)對(duì)大鼠移植心臟存活的影響，探討PUVA-SP-DC對(duì)移植免疫調(diào)節(jié)的可能作用機(jī)制。 方法：1、采用腹腔雙血管端側(cè)吻合法建立大鼠腹部異位心臟移植模型；采用改良的二袖套法建立大鼠原位肝臟移植模型；2、體外分離大鼠骨髓前體細(xì)胞，在重組大鼠GM-CSF和IL-4的刺激下，培養(yǎng)擴(kuò)增大鼠骨髓來(lái)源imDC，顯微鏡下觀察DC的生長(zhǎng)狀態(tài)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面分子表達(dá)；3、采用PUVA的方法，誘導(dǎo)大鼠脾細(xì)胞凋亡，通過(guò)流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)凋亡的誘導(dǎo)情況，將供者凋亡脾細(xì)胞(PUVA-SP)與受者imDC共同培養(yǎng)，應(yīng)用熒光顯微鏡，觀察DC吞噬同種凋亡細(xì)胞的能力，通過(guò)FCM檢測(cè)DC表面分子表達(dá)的變化情況，通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)了解PUVA-SP-DC刺激受者T細(xì)胞增殖的能力；4、以DA大鼠為供者、LEW大鼠為受者，心臟移植術(shù)前4天經(jīng)舌下靜脈輸注不同的細(xì)胞。根據(jù)輸注細(xì)胞的不同將實(shí)驗(yàn)大鼠分為5組：①Control組：?jiǎn)渭冚斪BS；②DC組：輸注受者DC細(xì)胞；③SP-DC組：輸注負(fù)載供者脾細(xì)胞(SP)的受者DC；④PUVA-SP組：輸注供者PUVA處理的脾細(xì)胞；⑤PUVA-SP-DC組：輸注負(fù)載供者PUVA-SP的受者DC。觀察各組小鼠移植心臟的存活時(shí)間和組織病理學(xué)改變，檢測(cè)受者血清中細(xì)胞因子表達(dá)及外周血淋巴細(xì)胞Foxp3表達(dá)狀況。 結(jié)果：1、成功建立了穩(wěn)定的大鼠腹部異位心臟移植模型和原位肝臟移植模型；2、在GM-CSF和IL-4的刺激下，可從大鼠骨髓培養(yǎng)擴(kuò)增大量的imDC，在形態(tài)上表現(xiàn)為未成熟狀態(tài)，細(xì)胞表面CD80、CD86、OX-6表達(dá)較低；3、脾細(xì)胞經(jīng)PUVA處理后，繼續(xù)培養(yǎng)過(guò)夜，可獲得70％的凋亡脾細(xì)胞；4、熒光顯微鏡觀察顯示imDC可有效吞噬同種PUVA脾細(xì)胞，吞噬后并不刺激DC的成熟；5、混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)顯示，PUVA-SP-DC刺激受者T細(xì)胞增殖反應(yīng)的能力較低，PUVA-SP-DC還可誘導(dǎo)受者T細(xì)胞Foxp3表達(dá)上調(diào)，培養(yǎng)上清中的IFN-γ水平較低；6、各組同種異體大鼠移植心臟的平均存活時(shí)間(MST)分別是：Control組6.7天，DC組7.8天，PUVA-SP組5.3天，SP-DC 5.5天，PUVA-SP-DC12.4天。PUVA-SP-DC組的MST明顯長(zhǎng)于其余各組。8、與其余各組相比，PUVA-SP-DC組大鼠血清Th1型細(xì)胞因子(IL-2和IFN-γ)的表達(dá)最低，而Th2型細(xì)胞因子(IL-10和IL-4)的表達(dá)顯著升高；9、PUVA-SP-DC組大鼠外周血Foxp3表達(dá)明顯高于其余各組。 結(jié)論：1、應(yīng)用顯微縫合技術(shù)可建立穩(wěn)定的大鼠異位心臟移植模型；2、應(yīng)用改良的二袖套法血管吻合法可建立穩(wěn)定的大鼠原位肝臟移植模型；3、大鼠骨髓細(xì)胞在GM-CSF和IL-4刺激下，可培養(yǎng)擴(kuò)增出能滿足實(shí)驗(yàn)需求的imDC；4、采用PUVA的處理方法可有效誘導(dǎo)脾細(xì)胞凋亡；5、imDC可有效吞噬PUVA處理的凋亡脾細(xì)胞(PUVA-SP)，PUVA-SP并不刺激DC的表型成熟；6、負(fù)載PUVA-SP的DC誘導(dǎo)受者T細(xì)胞的免疫低反應(yīng)性及Foxp3表達(dá)上調(diào)；7、輸注負(fù)載PUVA-SP的受者imDC，可延長(zhǎng)大鼠移植心臟的存活時(shí)間；8、PUVA-SP-DC的共刺激分子表達(dá)較低，受者Th1／Th2平衡向Th2方向偏移，移植受者Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)比例增高，，可能是移植免疫反應(yīng)下調(diào)的主要機(jī)制。
[Abstract]:Objective : To establish a rat abdominal ectopic heart transplantation model and orthotopic liver transplantation model ; 2 . To establish a method of in vitro culture to amplify the immature dendritic cells ( imDc ) of rat bone marrow derived immature dendritic cells ( imDc ) ; to observe the effect of imDC on the ability of PUVA - SP to induce apoptosis of rat spleen cells ; and to observe the effect of imDC ( PUVA - SP - DC ) on the survival of transplanted heart in rats , and to explore the possible mechanism of PUVA - SP - DC on transplantation immune regulation . Methods : 1 . The rat model of abdominal ectopic heart transplantation was established by using modified two - cuff method . The rat bone marrow derived imDC was cultured in vitro by modified two - cuff method . Results : 1 . A stable rat abdominal ectopic heart transplantation model and orthotopic liver transplantation model were successfully established . In the stimulation of GM - CSF and IL - 4 , the expression of IL - 2 and IFN - 緯 in PUVA - SP - DC group was lower than that in control group . Conclusion : 1 . A stable rat orthotopic liver transplantation model can be established by using micro - suture technique ; 2 . An improved rat orthotopic liver transplantation model can be established by using modified two - cuff method .

【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 馬毅,何曉順,陳規(guī)劃;大鼠原位肝移植模型的手術(shù)技巧及并發(fā)癥的預(yù)防[J];中華顯微外科雜志;2003年01期

本文編號(hào)：1396826