本文關(guān)鍵詞：綠熒光蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成內(nèi)皮細(xì)胞的研究　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：血管組織工程(vessel tissue engineering)研究的重點(diǎn)問(wèn)題之一是種子細(xì)胞,種子細(xì)胞來(lái)源缺乏是組織工程中的一大難題。內(nèi)皮細(xì)胞作為種子細(xì)胞在血管組織工程研究中具有重要作用,如何獲取足量的內(nèi)皮細(xì)胞是目前有待解決的問(wèn)題。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞因具有取材方便、對(duì)機(jī)體無(wú)害、自體移植不存在免疫排斥問(wèn)題以及分化類型廣泛等突出優(yōu)勢(shì)而有望成為血管組織工程中種子細(xì)胞的新來(lái)源。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分化機(jī)制和誘導(dǎo)條件目前尚未闡明。多數(shù)觀點(diǎn)認(rèn)為,其與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞所處的微環(huán)境密切相關(guān),可能是微環(huán)境中所含的各種因子促成了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向該環(huán)境所需要的細(xì)胞或組織分化。已有研究表明高表達(dá)的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和血流剪切力在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞的定向分化中均有顯著作用,但如何采用合理有效的誘導(dǎo)方式有待于進(jìn)一步的探討。 目的 研究綠熒光蛋白(green fluorescent protein, GFP)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)體外分離培養(yǎng)及擴(kuò)增能力,探討其骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在不同誘導(dǎo)條件和方式下向內(nèi)皮細(xì)胞定向分化能力,為在體研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法 (1)選用GFP小鼠作為研究對(duì)象,分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并在體外進(jìn)行細(xì)胞的擴(kuò)增和傳代。(2)應(yīng)用VEGF cDNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和直接添加VEGF的方法對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo),并比較兩者對(duì)GFP小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為內(nèi)皮細(xì)胞的作用,對(duì)其結(jié)果進(jìn)行免疫熒光檢測(cè),計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞比例,統(tǒng)計(jì)分析。選出高效的誘導(dǎo)方式。(3)分組誘導(dǎo),實(shí)驗(yàn)分為3個(gè)實(shí)驗(yàn)組,即①切應(yīng)力組:直接置于平行板流動(dòng)腔內(nèi)應(yīng)用切應(yīng)力(8dyn/cm~2)誘導(dǎo)24h;②轉(zhuǎn)基因誘導(dǎo)靜止組:將MSCs細(xì)胞行VEGF質(zhì)粒轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)培養(yǎng);③轉(zhuǎn)基因誘導(dǎo)切應(yīng)力組:將MSCs細(xì)胞行VEGF質(zhì)粒轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)后置于平行板流動(dòng)腔內(nèi)在切應(yīng)力條件下(8dyn/cm~2)誘導(dǎo)24h。之后再將各組細(xì)胞分別置于培養(yǎng)板培養(yǎng)1,3,5,7,10天,免疫熒光檢測(cè)其分化效果。 結(jié)果 (1)MSCs每擴(kuò)增一代,細(xì)胞數(shù)量增加4～8倍,7.0×10~3個(gè)原代MSCs體外擴(kuò)增3代即獲得1.4×10~8個(gè)細(xì)胞。連續(xù)傳代10代后仍可保持旺盛的分裂能力,說(shuō)明GFP小鼠MSCs具有良好的體外的培養(yǎng)擴(kuò)增的能力。(2)直接添加濃度為25mg/l的VEGF
[Abstract]:Bone marrow mesenchymal stem cells are expected to be a new source of seed cells in vascular tissue engineering . The differentiation mechanism and inducing conditions of bone marrow mesenchymal stem cells are closely related to the microenvironment of bone marrow mesenchymal stem cells . Objective To investigate the in vitro isolation and amplification of green fluorescent protein ( GFP ) mouse bone marrow mesenchymal stem cells ( MSCs ) , and to explore the ability of bone marrow mesenchymal stem cells to directionally differentiate into endothelial cells under different induction conditions and modes . Methods ( 1 ) Using GFP mouse as the research object , the bone marrow mesenchymal stem cells were isolated and cultured , and the cells were amplified and passaged in vitro . Results ( 1 ) MSCs were amplified by 4 - 8 times and 7.0 脳 10 ~ 3 primary MSCs were amplified in vitro for 3 generations to obtain 1.4 脳 10 ~ 8 cells .

【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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1 李秀森,郭子寬,楊靖清,劉曉丹,侯春梅,唐佩弦,毛寧;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2000年05期

2 郭曉東,杜靖遠(yuǎn),鄭啟新,劉勇,段德宇,劉維鋼;TGF-β_1基因轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞的量效關(guān)系及安全性研究[J];同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年02期

3 劉述,謝瑤,陳系古,姚志彬;小鼠胚胎干細(xì)胞植入大鼠腦內(nèi)分化的研究(英文)[J];中國(guó)臨床康復(fù);2003年16期

4 郭子寬,唐佩弦,劉曉丹,楊靖清,李秀森,陳小三,毛寧;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞支持體外造血(英文)[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2000年02期

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本文編號(hào)：1393251