發(fā)布時間：2018-01-05 18:01

  本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌三聯(lián)融合毒素的表達及免疫特性研究　出處：《吉林大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 以金黃色葡萄球菌腸毒素為研究對象,利用PCR方法分別擴增出金黃色葡萄球菌腸毒素SEA、SEB、SEE全基因片段。將克隆得到的三個毒素基因片段采用柔性的Linker序列(Gly4Ser)進行基因串聯(lián)(SEA-SEB-SEE),通過PCR延伸法,擴增出了融合毒素基因T,目的基因全長序列2190bp,包括2個Linker序列,并定向克隆到表達質(zhì)粒pET-28a(+)的EcoR I和XhoI位點之間,構(gòu)建了重組表達質(zhì)粒pET-28a(+)-T,且在表達宿主菌E. coli BL21 (DE3)中得到有效表達。表達蛋白主要以包涵體形式存在(表達量為26.4%)。將表達的包涵體蛋白經(jīng)過純化,免疫吉戎獺兔制備血清抗體,經(jīng)ELISA和瓊脂擴散試驗檢測表明,表達的融合毒素T具有較好的抗原性,其抗體能夠與三種天然毒素發(fā)生免疫反應(yīng),與多種非目標菌和毒素不反應(yīng),具有較好的特異性。表明多個基因串聯(lián)可達2190bp仍能在原核載體表達,表達產(chǎn)物可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生具有廣譜反應(yīng)特性的抗體。本研究利用融合毒素廣譜抗體建立食物中毒菌快速檢測方法奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Staphylococcus aureus enterotoxin was amplified by PCR. SEE complete gene fragment. The three toxin gene fragments were cloned using the flexible Linker sequence Gly4Ser. to carry out the gene series SEA-SEB-SEE). The fusion toxin gene T was amplified by PCR extension. The target gene was 2190bp, including two Linker sequences. The recombinant expression plasmid pET-28a (pET-28a) was constructed by cloning into the EcoR I and XhoI sites of the expression plasmid pET-28a (pET-28a ()). The expressed protein was mainly in the form of inclusion body (26.4%). The expressed inclusion body protein was purified. Serum antibodies were prepared by immunizing Jjong Rex rabbits. ELISA and Agar diffusion tests showed that the expressed fusion toxin T had good antigenicity and its antibody could react with three natural toxins. No reaction with a variety of non-target bacteria and toxins showed that multiple genes could be expressed in prokaryotic vector in tandem with 2190bp. The expression product can induce the production of antibodies with broad-spectrum reaction. This study established a rapid detection method for food poisoning bacteria by using the fusion toxin broad-spectrum antibody.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R378

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本文編號：1384201