發(fā)布時間：2018-01-04 17:32

  本文關(guān)鍵詞：反義基因抑制PLOD2和Ι型膠原蛋白表達的研究　出處：《江西醫(yī)學(xué)院》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 寡脫氧核苷酸 反義 賴氨酸羥化酶2 基因 Ⅰ型膠原 肝纖維化

【摘要】：目的觀察不同序列的反義寡脫氧核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)對小鼠成纖維細胞(NIH/3T3) PLOD2(procollage-lysine 2-oxoglutarate5-dioxygenase 2)mRNA 和Ι型膠原蛋白表達的抑制效果。 方法NIH/3T3 成纖維細胞接種于6 孔板后,加入三種不同序列的反義ODN(針對翻譯起始部、針對第一第二外顯子連接部、針對翻譯終止部)和一種公共錯義鏈。經(jīng)5%CO2 37℃培養(yǎng)后,收集細胞以提取總RNA 和總蛋白,然后用RT-PCR 方法檢測PLOD2mRNA、Ι型膠原蛋白α1 鏈(COLIα1)mRNA 的表達,同時以β-actin 表達為內(nèi)對照;另以Western blot 方法檢測Ι型膠原蛋白的表達量。將所得結(jié)果行組間方差統(tǒng)計分析。 結(jié)果1.對PLOD2mRNA、COLIα1mRNA 的影響:翻譯起始部、第一外顯子和第二外顯子連接部、翻譯終止部的反義ODN 作用后的PLOD2 抑制率分別是0.57±0.05、0.22±0.05、0.31±0.06。反義ODN 組對PLOD2mRNA 的表達具有顯著的抑制作用(P0.05)。其中,翻譯起始部的反義ODN 表現(xiàn)的抑制作用最強。反義及錯義ODN 組COLIα1/β-actin 標(biāo)準(zhǔn)值分別是1.08±0.05、1.08±0.04、1.10±0.02、1.13±0.01,空白組為1.14±0.04,反義組與各對照組相比無明顯下降,各組間無顯著性差異(P㧐0.05)。 2.對Ι型膠原蛋白表達的影響:翻譯起始部、第一外顯子和第二外顯子連接部、終止密碼部的反義ODN 作用后的Ι型膠原蛋白抑制率分別是0.44±0.01、0.18±0.04、0.23±0.03。反義ODN 組能顯著的抑制Ι型膠原蛋白的表達(P0.05)。其中,翻譯起始部位的反義ODN 表現(xiàn)的抑制作用最強。 結(jié)論反義ODN 對小鼠NIH/3T3 細胞PLOD2mRNA 和Ι型膠原蛋白的表達有明顯的抑制作用。不同序列的反義ODN 對PLOD2mRNA 和Ι型膠原蛋白表達
[Abstract]:Objective To observe the effect of different sequence of antisense oligodeoxynucleotides (oligodeoxynucleotide, ODN) on mouse fibroblast (NIH/3T3) PLOD2 (procollage-lysine 2-oxoglutarate5-dioxygenase 2) the inhibitory effect of the expression of mRNA and type icollagen.
Methods NIH/3T3 fibroblasts were seeded in 6 well plate, adding three kinds of antisense sequence of ODN (according to the translation initiation of the first exon junction, the translation termination Department) and a common missense chain. Cultured 5%CO2 to 37 DEG C, cells were collected to extract total RNA and proteins then use the RT-PCR method to detect the PLOD2mRNA, type I collagen alpha 1 chain (COLI alpha 1) the expression of mRNA, while the beta -actin expression as an internal control; the other by Western blot methods to detect the expression of type I collagen. The results were statistical analysis of variance.
The effect of COLI 1. on PLOD2mRNA, alpha 1mRNA: translation initiation of exons and exon junction first, antisense ODN of translation termination after PLOD2 inhibition rates were significantly inhibited with the expression of 0.57 + 0.05,0.22 + 0.05,0.31 + 0.06. antisense ODN group of PLOD2mRNA (P0.05). Among them, the strongest inhibitory effect of antisense ODN expression of translation initiation. Antisense and missense ODN group COLI alpha 1/ beta -actin standard values were 1.08 + 0.05,1.08 + 0.04,1.10 + 0.02,1.13 + 0.01, 1.14 + 0.04 in blank group, antisense group and the control group had no significant decrease compared to no significant differences between the groups (P? 0.05).
Effect of expression of type I collagen 2.: translation initiation of exons and exon junction first, termination type icollagen antisense ODN password Ministry of the inhibition rate were 0.44 + 0.01,0.18 + 0.04,0.23 + 0.03. antisense ODN group can significantly inhibit the expression of type I collagen egg white (P0.05). Among them, the strongest inhibitory effect of antisense ODN expression of translation initiation site.
Conclusion the expression of antisense ODN on PLOD2mRNA and NIH/3T3 cells of mouse type I collagen significantly inhibited collagen. Different sequences of antisense ODN on the expression of PLOD2mRNA and type I

【學(xué)位授予單位】：江西醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R575.2;R346

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 余新炳,方建民,羅樹紅;惡性瘧原蟲:組氨酸富集蛋白基因反義寡脫氧核苷酸體外抗瘧作用初步研究[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2000年04期

2 丁培芳,孫汶生,馬春紅,張志傳!250014,馬京香!250014,王濰!250014;針對HBV調(diào)節(jié)基因ENⅡ的ASON抑制HBV復(fù)制表達的體外研究[J];中國輸血雜志;2000年04期

3 唐敏,劉松青,王吉剛;脂質(zhì)體介導(dǎo)ANG反義核酸對A549細胞作用的研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2002年11期

4 寧曉燕,楊冬華暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院華僑醫(yī)院消化科 ,杜江,徐重,梁巧明,楊波;反義IGF-Ⅱ?qū)θ烁伟┘毎闔epG_2惡性表型的抑制[J];腫瘤;2002年02期

5 吳曉雄!100853北京,汪月增!100853北京,裴雪濤,樓方定!100853北京,張伯龍!100853北京,王立生,徐黎;WT1反義寡核苷酸對白血病細胞增殖和凋亡的影響[J];中華血液學(xué)雜志;1999年12期

6 曾嶸,李進,戴云,劉小蓉,安靚;三種反義c-myc RNA對體外血管平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)換的影響[J];解剖學(xué)報;2000年S1期

7 張曉啟,劉旭盛,劉亮;同源盒基因B2反義寡核苷酸對內(nèi)皮細胞的影響[J];中華燒傷雜志;2001年06期

8 王豐,田毓華,李凌,陳霞芳,胡宏惠,李川源,黃倩;阻斷VEGF旁分泌通路抑制乳腺癌血管生成與腫瘤生長[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報;2002年02期

9 張明,郭航,劉祿成,李然偉,范海濤,朱德淳;VEGF反義寡核苷酸抑制人膀胱癌細胞VEGF表達的作用和效果[J];中國老年學(xué)雜志;2004年04期

10 張學(xué)敏,呂聯(lián)煌;肽核酸作為反基因和反義治療藥物的研究進展[J];國外醫(yī)學(xué).生理.病理科學(xué)與臨床分冊;1999年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 朱世柱;丁曉勇;薛敬玲;孟揚;王紀(jì);;Ⅰ型膠原在牙組織內(nèi)的分布及其意義[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

2 金暉;蔡若男;張麗娟;孫子林;;糖基化終產(chǎn)物對成骨細胞Ⅰ型膠原積聚的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會成立十周年論文匯編[C];2011年

3 古麗莎;凌均h，

本文編號：1379413