本文關(guān)鍵詞：大腸桿菌志賀毒素Ⅱ型e突變體和蓖麻毒素誘導(dǎo)Vero細(xì)胞凋亡的研究　出處：《貴州大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：探討志賀毒素Ⅱ型e突變體(shiga toxin Ⅱe varriant，Stx2e)和蓖麻毒素(ricin)誘導(dǎo)非洲綠猴腎細(xì)胞系Vero細(xì)胞凋亡的作用及其相關(guān)凋亡基因的表達(dá)。 方法：用硫酸銨沉淀法制備Stx2e突變體粗毒素；經(jīng)Sephrose 4B柱親和層析和SephadexG—100凝膠過(guò)濾，分離得到ricin。分別用不同濃度的Stx2e粗毒素和ricin處理Vero細(xì)胞，采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)、AO／EB熒光染色法、DNA Ladder檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生；應(yīng)用western blotting檢測(cè)凋亡相關(guān)基因Caspase-9、Bax和Caspase-3表達(dá)的變化。 結(jié)果：Stx2e粗毒素在體外對(duì)Vero細(xì)胞有明顯的誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)，且呈較明顯的劑量和時(shí)間依賴性；ricin對(duì)Vero細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)，呈較明顯的劑量和時(shí)間依賴性。在Stx2e粗毒素和ricin作用下，顯微鏡下可見(jiàn)Vero細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核固縮斷裂成碎塊，核膜消失，細(xì)胞膜完整且有突起，等細(xì)胞凋亡征象；2ug／ml Stx2e粗毒素作用24h的Vero細(xì)胞，1ug／ml ricin作用36h的Vero細(xì)胞AO／EB染色后可分別見(jiàn)90％和18％細(xì)胞的胞核染色質(zhì)凝集，核固縮成團(tuán)、碎裂，形成凋亡小體。western blotting表明2ug／ml的Stx2e在作用24h后，Bax表達(dá)上調(diào)，Caspase-9的表達(dá)與對(duì)照組相比無(wú)顯著差別，caspase-3的表達(dá)明顯增強(qiáng)。1ug／mlricin在作用36h后，Bax表達(dá)下調(diào)，Caspase-9的表達(dá)與對(duì)照組相比無(wú)顯著差別，caspase-3表達(dá)增強(qiáng)。 結(jié)論：Stx2e和ricin有誘導(dǎo)Vero細(xì)胞凋亡的作用。Stx2e誘導(dǎo)Vero細(xì)胞凋亡與Bax、Caspase-3有關(guān)，可能Stx2e通過(guò)Bax加速線粒體中細(xì)胞色素C的釋放，，提高Caspases的活性。Stx2e誘導(dǎo)的Vero細(xì)胞的凋亡與Caspase-9無(wú)關(guān)。ricin誘導(dǎo)的Vero細(xì)胞的凋亡與和Caspase-3有關(guān)，與Caspase-9、Bax無(wú)關(guān)。Stx2e和ricin均為核糖體失活蛋白，二者使核糖體失活的機(jī)制相同，但二者使細(xì)胞凋亡的機(jī)理不同，可能抑制蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞凋亡是兩個(gè)獨(dú)立的過(guò)程。
[Abstract]:Objective: to investigate shiga toxin 鈪

本文編號(hào)：1379255