本文關(guān)鍵詞：細(xì)胞因子預(yù)處理對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖分化的影響　出處：《武漢大學(xué)》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:探討干細(xì)胞因子(SCF)和粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)增殖及促進(jìn)其向心肌細(xì)胞分化的作用。 方法:將SD大鼠隨機(jī)分成對(duì)照組、SCF組、G-CSF組和SCF+G-CSF聯(lián)合組,每組12只,雌雄不拘。SCF組大鼠用rmSCF(20μg/kg/d),G-CSF組大鼠用rmG-CSF(10μg/kg/d),SCF+G-CSF聯(lián)合組用rmSCF(20μg/kg/d)、rmG-CSF(10μg/kg/d),對(duì)照組用相等量的生理鹽水,均為每天一次皮下注射,連續(xù)5天,第7天處死大鼠,取股、脛骨的骨髓液,加入培養(yǎng)基接種培養(yǎng)。通過換液與傳代逐漸純化擴(kuò)增MSCs后,取第4代MSCs,檢測(cè)其生長曲線,并通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。同時(shí)酶消化法分離乳鼠的心肌細(xì)胞,3天后用DAPI(25μg/ml)標(biāo)記的P4MSCs與心肌細(xì)胞按1:2比例共培養(yǎng)。在共培養(yǎng)的第1d至第5d用免疫熒光技術(shù)分別檢測(cè)心肌特異性肌節(jié)肌球蛋白重鏈(MHC)、肌鈣蛋白T(TnT)的表達(dá),統(tǒng)計(jì)既有胞漿發(fā)出紅色熒光又有胞核發(fā)出藍(lán)色熒光的細(xì)胞數(shù)量(即表達(dá)TnT或MHC的MSCs的數(shù)量)及所有胞核發(fā)藍(lán)色熒光的細(xì)胞數(shù)量(即DAPI-MSCs的數(shù)量),兩者相比取平均值即為向心肌樣細(xì)胞分化的DAPI-MSCs百分率。 結(jié)果:(1) 經(jīng)SCF和G-CSF預(yù)處理后,骨髓干細(xì)胞貼壁時(shí)間縮短,細(xì)胞集落形成早且集落較多,形成細(xì)胞單層的時(shí)間縮短,提前2～3天進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期,亦提前到達(dá)平臺(tái)期。(2) MSCs細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果:SCF和G-CSF聯(lián)合應(yīng)用能明顯誘導(dǎo)MSCs進(jìn)入S期(24.3+1.5%),與SCF組(17.6±2.4%,P0.05)、G-CSF組(15.4+1.8%,P0.05)及對(duì)照組(6.5+1.2%,P0.01)相比有顯著差異。同時(shí),單因子SCF組和G-CSF組與對(duì)照組相比,也明顯的促進(jìn)MSCs由G0/G1期進(jìn)入S期(P0.01)。(3) 免疫細(xì)胞化學(xué)分析:MSCs與心肌細(xì)胞共培養(yǎng)后,SCF和G-CSF聯(lián)合組MSCs表達(dá)心肌特異性蛋白MHC及TnT的陽性百分率均顯著高于單細(xì)胞因子組(P0.05)和對(duì)照組(P0.01),單細(xì)胞因子組MSCs的心肌特異性蛋白MHC及TnT的陽性表達(dá)亦較對(duì)照組高(P0.01),而且各細(xì)胞因子組MSCs的TnT陽性表達(dá)較對(duì)照組提前一天發(fā)生。 結(jié)論:1.細(xì)胞因子G-CSF與SCF能夠明顯促進(jìn)MSCs增殖,刺激MSCs由G_0/G_1期進(jìn)入S期;2.在體外模擬心肌微環(huán)境的條件下,細(xì)胞因子G-CSF與SCF預(yù)處理過的MSCs定向分化為心肌細(xì)胞的分化率有顯著提高;3.與單用SCF或G-CSF相比,聯(lián)合運(yùn)用G-CSF與SCF對(duì)MSCs的促增殖、促分化能力更加顯著。
[Abstract]:Objective: To investigate the effects of stem cell factor (SCF) and granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) on the proliferation of bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) and their differentiation into cardiomyocytes.
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本文編號(hào)：1376131