發(fā)布時(shí)間：2018-01-03 22:04

  本文關(guān)鍵詞：人臍血干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞的研究　出處：《浙江大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 臍血(Umbilical Cord Blood，UCB)中含有造血干／祖細(xì)胞(Hematopoietic Stem／Progenitor Cells，HSCs)，但與骨髓和成體外周干細(xì)胞有所不同。在過去的20年中，已經(jīng)明確了臍血干細(xì)胞的存在與特性，臍血造血干／祖細(xì)胞的數(shù)量相當(dāng)或超過了骨髓且大大高于成體外周血中的干細(xì)胞。與成體細(xì)胞相比，臍血造血干／祖細(xì)胞能在體外產(chǎn)生大量的集落，有不同生長因子存在時(shí)，能在體外培養(yǎng)基中長期擴(kuò)增。臍血移植可治療各種血液病，使造血重建且與常規(guī)治療相比移植物抗宿主病(Graft Versus Host Disease，GVHD)發(fā)生率低。另外，臍血在基礎(chǔ)研究和臨床研究中存在的倫理問題較少，臍血的采集不會(huì)對(duì)新生兒造成危害，臍血干細(xì)胞可以凍存，復(fù)蘇后不損傷干細(xì)胞的功能和活性，可以移植給受者。因此臍血可成為移植治療血液病的更好的干細(xì)胞來源。 目前的研究表明，無論是在體內(nèi)還是體外，UCB還是移植治療肝損傷的很好干細(xì)胞來源。在含生長因子組合的培養(yǎng)體系中，臍血干細(xì)胞能分化為肝細(xì)胞。在用細(xì)胞移植治療肝損傷的模型中，人UCB細(xì)胞顯示了分化為肝細(xì)胞的功能特性，，在肝損傷的SCID鼠外周血中能檢測(cè)到釋放的人白蛋白。 本實(shí)驗(yàn)的目的是探索肝細(xì)胞生長因子(Hepatocyte Growth Factor，HGF)、干細(xì)胞生長因子(Stem Cell Factor，SCF)及白血病抑制因子(Leukemia Inhibitory　Factor，LIF)體外誘導(dǎo)人臍血造血干細(xì)胞分化為肝細(xì)胞的可行性，為肝組織工程提供新的種子細(xì)胞來源。本研究采用密度梯度離心法和免疫磁珠分選系統(tǒng)，獲取人臍血CD34+造血干細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)分化，分為誘導(dǎo)組：DMEM+HGF(10ng／ml)+SCF(10ng／ml)+LIF(10ng／ml)；陰性對(duì)照組：不加HGF、SCF、LIF三種因子。在培養(yǎng)第21天，用熒光倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)；以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)、免疫組織化學(xué)和免疫熒光分析檢測(cè)白蛋白(Albumin，ALB)，人肝細(xì)胞型細(xì)胞角蛋白(Cytokeratin-18，CK18)和甲胎蛋白(Alpha—Fetoprotein，AFP)的基因和蛋白表達(dá)；用放射免疫分析法測(cè)定第7、14、21、23、25天細(xì)胞培養(yǎng)上清液中人ALB的含量。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)在誘導(dǎo)組中，HSCs出現(xiàn)明顯的細(xì)胞形態(tài)、體積和數(shù)量變化，可見細(xì)胞變圓，多呈肝細(xì)胞樣細(xì)胞。RT-PCR檢測(cè)：誘導(dǎo)組第21天出現(xiàn)較強(qiáng)的白蛋白基因表達(dá)，AFP表達(dá)較弱，與正常肝細(xì)胞相似，陰性對(duì)照組，無表達(dá)。免疫熒光和免疫細(xì)胞化學(xué)分別檢測(cè)ALB、人肝細(xì)胞型CK18：第21天ALB和人肝細(xì)胞型CK18呈陽性；陰性對(duì)照組，均未見表達(dá)。細(xì)胞培養(yǎng)上清液中ALB含量在第21天達(dá)到峰值，第21天后明顯下降，與陰性對(duì)照相比差異有顯著性。 研究表明人臍血HSCs在一定的誘導(dǎo)條件下具有向肝細(xì)胞分化的潛能。
[Abstract]:The cord blood stem cells can be used to treat various kinds of blood diseases , and the umbilical cord blood stem cells can be stored in vitro . The present study shows that , whether in vivo or in vitro , ucb is a very good source of stem cell transplantation for the treatment of liver injury . In the growth factor - containing culture system , cord blood stem cells can differentiate into liver cells . In the model of cell transplantation for treating liver injury , the human ucb cells display the functional characteristics of differentiation into hepatocytes , and the released human albumin can be detected in the peripheral blood of SCID mice with liver injury . The purpose of this study was to explore the feasibility of differentiation of human umbilical cord blood hematopoietic stem cells into hepatocytes in vitro by exploring hepatocyte growth factor ( HGF ) , stem cell factor ( SCF ) and leukemia inhibitory factor ( LIF ) . The results showed that in the induction group , HSCs appeared obvious cell morphology , volume and quantity changes , and the cells became round and multi - hepatocyte - like cells . RT - PCR showed that the expression of albumin gene appeared in the 21 days of the induction group , and the expression of AFP was weak . There was no expression in the negative control group . There was no expression in the negative control group . There was no expression in the negative control group . The results showed that human umbilical cord blood HSCs had the potential to differentiate into hepatocytes under certain induction conditions .

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1375767