本文關(guān)鍵詞：IL-1ra突變體的研究　出處：《中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：白細胞介素1受體拮抗劑(IL-1ra)為IL-1家族中的一員,其本身無任何激動劑的作用,但能特異性地與IL-1受體結(jié)合,從而拮抗IL-1的各種生物學(xué)效應(yīng)。2001年,由Amgen公司生產(chǎn)的重組人白細胞介素1受體拮抗劑(rhIL-1ra,專利名稱為Kineret)被美國食品與藥物管理局(FDA)和歐洲EMEA批準上市,用于類風濕性關(guān)節(jié)炎的治療,但是由于微量的IL-1就可以引起完全的生物學(xué)效應(yīng),在疾病治療過程中只有IL-1ra與IL-1的比值達到10000-100000時才能有效地緩解癥狀,因此rhIL-1ra的用量高達100-150mg/d,頻繁用藥加重了病人的身體、心理和經(jīng)濟負擔。 本研究旨在利用定點突變,延長IL-1ra的半衰期,提高其代謝穩(wěn)定性。 本課題首先利用重疊延伸PCR對IL-1ra的基因進行以下幾個位點的突變:R~6K~7-AA,R~(93)K~(94)-AA,K~(97)R~(98)-AA。將IL-1ra及三個突變體的序列插入表達載體pTIG-Trx,利用大腸桿菌BL21(DE3)對其進行表達,表達產(chǎn)物先后經(jīng)鎳柱親和純化,SephadexG75凝膠過濾獲得純度在90%以上的目的蛋白。利用EL-4,CTLL-2細胞對目的蛋白進行體外活性檢測,結(jié)果表明,與IL-1ra相比,三個突變體的生物學(xué)活性并未降低。利用大耳白兔對野生型IL-1ra及三個突變體進行了初步的藥代動力學(xué)分析,其中3號突變體的半衰期與野生型IL-1ra相比提高了2.26倍。 本課題為提高IL-1ra的代謝穩(wěn)定性的研究奠定了初步的基礎(chǔ)。
[Abstract]:Interleukin-1 receptor antagonist (IL-1raa) is a member of the IL-1 family. It has no agonist effect on itself, but it can specifically bind to IL-1 receptor. In 2001, rhIL-1ra, a recombinant human interleukin-1 receptor antagonist, was produced by Amgen Company. The patent name Kinereta is approved by the Food and Drug Administration (FDA) and the European EMEA for the treatment of rheumatoid arthritis. However, a small amount of IL-1 can cause a complete biological effect. Only when the ratio of IL-1ra to IL-1 reaches 10000-100000 can the symptoms be effectively alleviated during the course of treatment. As a result, the use of rhIL-1ra is as high as 100-150 mg / d, increasing the physical, psychological and economic burden of patients. The aim of this study was to prolong the half-life and improve the metabolic stability of IL-1ra by site-directed mutation. In this study, overlap extension PCR was first used to mutate the IL-1ra gene in the following several loci. The sequences of IL-1ra and three mutants were inserted into the expression vector pTIG-Trx and expressed by E. coli BL21 (DE3). The expressed product was purified by nickel column affinity chromatography and purified by Sephadex G75 gel filtration. The target protein with purity above 90% was obtained by EL-4. The activity of the target protein was detected by CTLL-2 cells in vitro. The results showed that the activity of the target protein was higher than that of IL-1ra. The biological activity of the three mutants was not decreased. The pharmacokinetic analysis of wild type IL-1ra and three mutants was carried out by using large ear white rabbits. The half life of mutant 3 was 2.26 times higher than that of wild type IL-1ra. This paper lays a foundation for improving the metabolic stability of IL-1ra.
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R392

【共引文獻】

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本文編號：1373231