本文關(guān)鍵詞：人羊膜上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)及標(biāo)志分子的檢測(cè)分析　出處：《細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志》2014年12期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的進(jìn)行人羊膜上皮細(xì)胞(HAEC)的體外培養(yǎng),觀察其生物學(xué)特性,檢測(cè)其分子特征。方法取剖宮產(chǎn)術(shù)后人羊膜,應(yīng)用酶消化法獲得HAEC,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)變化;CCK-8法檢測(cè)HAEC的生長(zhǎng)曲線;Giemsa染色觀察HAEC的克隆形成率;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HAEC的細(xì)胞周期;取第2代HAEC,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其CD29、CD31、CD44、CD59、CD105、CD117、CD133、HLA-DR的表達(dá)。免疫熒光法檢測(cè)其CD9、上皮性鈣黏素(E-cadherin)、足糖萼素樣蛋白(PODXL)、階段特異性胚胎表面抗原4(SSEA-4)、性別決定區(qū)Y相關(guān)因子2蛋白(SOX2)、SSEA-1、Nanog蛋白、八聚體結(jié)合蛋白3/4(Oct-3/4)的表達(dá)情況。結(jié)果酶消化法可以獲得較純的HAEC,細(xì)胞呈貼壁生長(zhǎng),呈多角形,核呈圓形。細(xì)胞在貼壁后第3天進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)期。細(xì)胞周期分析顯示66%處于G0/G1期,S期細(xì)胞占31.69%,G2/M期細(xì)胞占2.31%。HAEC的克隆形成率為(9.33±2.00)%。流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示HAEC陽(yáng)性表達(dá)CD44、CD29、CD105、CD59,不表達(dá)CD31、CD117、CD133、HLA-DR。免疫熒光法檢測(cè)顯示HAEC表達(dá)胚胎干細(xì)胞相關(guān)分子CD9、E-cadherin、PODXL、SSEA-4、SOX2、SSEA-1、Nanog、Oct-3/4。結(jié)論HAEC可以在體外培養(yǎng)生長(zhǎng)并在一定時(shí)期內(nèi)保持其增殖活性;HAEC表達(dá)胚胎干細(xì)胞相關(guān)的表面標(biāo)志分子。
[Abstract]:Objective to investigate the biological characteristics and molecular characteristics of human amniotic epithelial cells (HAECs) in vitro. Methods Human amniotic membrane was obtained after cesarean section and HAEC was obtained by enzyme digestion. Cell growth was observed under inverted microscope. The growth curve of HAEC was detected by CCK-8 method. The clone formation rate of HAEC was observed by Giemsa staining. The cell cycle of HAEC was detected by flow cytometry. The second passage HAECs were collected and the CD29 CD31, CD41, CD4, CD59, CD105, CD117 and CD133 were detected by flow cytometry. Expression of HLA-DR. CD9, E-cadherin, POD XLL were detected by immunofluorescence. The stage specific embryonic surface antigen (4) SSEA-4A and the sex-determining region Y related factor 2 protein (SOX2) were identified as SSEA-1 / Nanog protein. The expression of octamer binding protein 3 / 4 Oct-3 / 4). Results the purified HAECs could be obtained by enzyme digestion. The cells were adherent and polygonal. Cell cycle analysis showed that 66% cells were in G _ 0 / G _ 1 phase and S phase, 31.69% cells were in G _ 0 / G _ 1 phase. The colony formation rate of G2 / M phase cells was 9.33 鹵2.00. HAEC positive expression of CD44-CD29 was detected by flow cytometry. CD105, CD59, CD31, CD117, CD137, HLA-DR.Immunofluorescence assay showed that HAEC expressed CD9, a molecule associated with embryonic stem cells. E-cadherin PODXLSEA-4SOX2 SSEA-1Nanog. Conclusion HAEC can grow in vitro and maintain its proliferative activity for a certain period of time. HAEC expresses surface marker molecules associated with embryonic stem cells.
【作者單位】： 暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(30872808,81100637) 暨南大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院科研培育專項(xiàng)基金(20120710)
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 羊膜是位于羊膜腔內(nèi)的一層透明薄膜,無(wú)神經(jīng)、血管、淋巴管。人羊膜上皮細(xì)胞(human amnioticepithelial cells,HAEC)位于羊膜的胎兒面。研究表明HAEC是受精后第8天從外胚層發(fā)育而來(lái),具有部分胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell,ESC)的特征。HAEC在不同生長(zhǎng)因子和微環(huán)境的調(diào)節(jié)下,可

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 周清;楊筱曦;阮余霞;蔡小芳;陳劍;;人羊膜上皮細(xì)胞的誘導(dǎo)分化[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年05期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 Saber Sakr;Laila Rashed;Waheba Zarouk;Rania El-Shamy;;Effect of mesenchymal stem cells on anti-Thy1,1 induced kidney injury in albino rats[J];Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine;2013年03期

2 Xiao-Yong Liu;Jian Chen;Qing Zhou;Jing Wu;Xiao-Ling Zhang;Li Wang;Xiao-Yan Qin;;In vitro tissue engineering of lamellar cornea using human amniotic epithelial cells and rabbit cornea stroma[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2013年04期

3 Min Yao;Jian Chen;Xiao-Xi Yang;Xiao-Ling Zhang;Qing-Shan Ji;Qing Zhou;Jin-Tang Xu;;Differentiation of human amniotic epithelial cells into corneal epithelial-like cells in vitro[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2013年05期

4 司家文;郭禮和;沈國(guó)芳;;羊膜上皮細(xì)胞的生物學(xué)特性和骨向分化[J];國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2014年05期

5 崔雪薇;楊帆;;胰島移植血管重建的研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)用鄉(xiāng)村醫(yī)生雜志;2013年12期

6 于永忠;王歡;譚強(qiáng);趙文博;崔玉東;;人羊膜上皮細(xì)胞對(duì)于生長(zhǎng)因子和ORFV的敏感性研究[J];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào);2013年04期

7 王鈺瑩;方寧;陳代雄;余麗梅;趙春華;;人羊膜上皮細(xì)胞原位移植對(duì)大鼠急性心肌梗死后心功能和心室重構(gòu)的改善作用[J];臨床心血管病雜志;2014年02期

8 王平;劉邦忠;劉光華;石明芳;楊名珍;陸志輝;;不同濃度維甲酸誘導(dǎo)體外培養(yǎng)人羊膜上皮細(xì)胞分化為神經(jīng)樣細(xì)胞的研究[J];中國(guó)臨床神經(jīng)科學(xué);2014年03期

9 溫明華;張淑華;劉秋玲;王云霞;吳志婷;葛郁芝;;人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠急性心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究[J];臨床心血管病雜志;2014年09期

10 方寧;章濤;陳代雄;;人羊膜細(xì)胞表型可塑性研究進(jìn)展[J];中國(guó)生物工程雜志;2008年S1期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張可華;袁寶珠;;治療性干細(xì)胞產(chǎn)品相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素[A];2012年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十二屆中國(guó)藥師周論文集[C];2012年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張明慧;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)肺癌細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移及自噬凋亡的調(diào)控作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

2 裴志勇;地黃低聚糖對(duì)同種異體脂肪組織來(lái)源干細(xì)胞移植治療小型豬急性心肌梗死效應(yīng)及機(jī)制的研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2011年

3 張嵬;hUC-MSC_S/hHGF基因修飾的hUC-MSC_S移植在心肌損傷修復(fù)中的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

4 袁春菊;Enalapril聯(lián)合人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞治療AMI的作用及機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2013年

5 趙靜;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療薄型子宮內(nèi)膜的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2013年

6 紀(jì)騰;腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞腫瘤歸巢相關(guān)性研究[D];華中科技大學(xué);2013年

7 李瓊;Gata4、Tbx5和Baf60c基因修飾脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞CD73~+亞群心肌化[D];華中科技大學(xué);2013年

8 薛茹月;基底硬度及細(xì)胞密度對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞骨分化的影響及機(jī)理研究[D];重慶大學(xué);2013年

9 周治來(lái);人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在修復(fù)脊髓損傷中的比較研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

10 張峗;TLR2在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)缺氧缺血性腦損傷中的作用及機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 郝曉娟;缺氧高糖預(yù)處理hUC-MSCs誘導(dǎo)分化為內(nèi)皮樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

2 齊映亮;直接快速液氮凍存人羊膜的初步研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

3 趙琦;脂肪來(lái)源干細(xì)胞旁分泌效應(yīng)對(duì)平滑肌細(xì)胞凋亡的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2013年

4 馮國(guó)紋;人羊膜及其聯(lián)合rhEGF凝膠治療皮膚III度燒傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2013年

5 秦小惠;移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)乳腺炎模型大鼠乳腺作用的研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 姚敏;體外誘導(dǎo)人羊膜上皮細(xì)胞分化為角膜上皮樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2013年

7 周承校;下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥長(zhǎng)段病變的腔內(nèi)治療[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

8 劉胄;髓芯減壓聯(lián)合干細(xì)胞移植治療成人股骨頭壞死的初期臨床報(bào)告[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

9 羅明雄;中老年患者KLOTHO基因G-395A多態(tài)性在不同年齡組的分布及與心衰和心肌纖維化的相關(guān)性研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

10 常遠(yuǎn);在體生物發(fā)光成像術(shù)觀察骨髓來(lái)源細(xì)胞參與脈絡(luò)膜新生血管的形成[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 陳茜;楊筱曦;蔡小芳;蔡繼業(yè);;原子力顯微鏡對(duì)人羊膜上皮細(xì)胞的觀察[J];生物技術(shù);2010年02期

2 蔡小芳;楊筱曦;蔡繼業(yè);鄧華;;正常人眼角膜上皮細(xì)胞的原子力顯微鏡觀察[J];分析測(cè)試學(xué)報(bào);2009年08期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉小勇;陳劍;吳靜;周清;王彥平;李紅;徐錦堂;趙松濱;;人羊膜上皮細(xì)胞的原代及傳代培養(yǎng)[J];廣東醫(yī)學(xué);2007年02期

2 魯靜;趙敏;張琪;胡柯;秦應(yīng)祥;;四種方法保存羊膜的組織形態(tài)學(xué)研究[J];眼科新進(jìn)展;2007年07期

3 宋秀軍;陳代雄;江其生;;人羊膜上皮細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2008年25期

4 宋秀軍;陳代雄;方寧;章濤;劉祖林;劉金偉;萬(wàn)衛(wèi)紅;;人羊膜上皮細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞的特性[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2008年38期

5 董智勇;李忱;陳東;孟曉婷;李玉林;;大鼠羊膜上皮細(xì)胞神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因的表達(dá)[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2009年09期

6 方寧;宋秀軍;張路;章濤;陳代雄;;人羊膜上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年02期

7 陳茜;楊筱曦;蔡小芳;蔡繼業(yè);;原子力顯微鏡對(duì)人羊膜上皮細(xì)胞的觀察[J];生物技術(shù);2010年02期

8 金玲;陳劍;吳靜;徐錦堂;周清;劉小勇;趙松濱;;人羊膜上皮細(xì)胞的分離、純化及其生物學(xué)特性研究[J];廣東醫(yī)學(xué);2010年16期

9 湯宇;謝佳芯;許家軍;;羊膜上皮細(xì)胞的干細(xì)胞樣特性[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2010年05期

10 楊水平;陳劍;;人羊膜上皮細(xì)胞分化為結(jié)膜上皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)職業(yè)醫(yī)學(xué);2011年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 李瑋;漆洪波;孫江川;;人羊膜上皮細(xì)胞在纖維蛋白支架上生長(zhǎng)情況的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國(guó)圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

2 張譯文;馬小燕;丁盛娣;謝愛蘭;朱雪瓊;;復(fù)方丹參對(duì)人羊膜上皮細(xì)胞水通道蛋白3表達(dá)的影響[A];2012年浙江省婦產(chǎn)科學(xué)及圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)暨《婦產(chǎn)科常見疾病規(guī)范化治療新進(jìn)展》及《圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)熱點(diǎn)追蹤》學(xué)習(xí)班論文集[C];2012年

3 馬小燕;沈奇;王晶晶;謝愛蘭;朱雪瓊;;MAPK/ERK信號(hào)通路對(duì)羊膜上皮細(xì)胞中水通道蛋白3表達(dá)的調(diào)控[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議產(chǎn)科會(huì)場(chǎng)（產(chǎn)科學(xué)組、妊高癥學(xué)組）論文匯編[C];2012年

4 漆洪波;李瑋;卞度宏;;羊膜上皮細(xì)胞損傷后在纖維蛋白支架及細(xì)胞生長(zhǎng)因子作用下的修復(fù)情況研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國(guó)圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

5 王丹妮;季鳳清;孫海梅;李榮平;趙春禮;楊慧;;羊膜上皮細(xì)胞條件培養(yǎng)液對(duì)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)分化的影響[A];2007年中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2007年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳勇;有望廣泛應(yīng)用于再生醫(yī)療領(lǐng)域[N];健康報(bào);2005年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 周清;人羊膜上皮細(xì)胞構(gòu)建組織工程角膜上皮的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2010年

2 楊水平;誘導(dǎo)人羊膜上皮細(xì)胞分化用于結(jié)膜重建的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2009年

3 羅宏武;人羊膜上皮細(xì)胞橫向分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞及脾內(nèi)移植的初步研究[D];中南大學(xué);2008年

4 朱雪敏;綿羊羊膜上皮細(xì)胞的分化潛能及在骨缺損模型治療中的應(yīng)用[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 苗曉晴;誘導(dǎo)人羊膜上皮細(xì)胞向結(jié)膜樣上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的初步研究[D];暨南大學(xué);2009年

2 金玲;應(yīng)用培養(yǎng)的羊膜上皮細(xì)胞重建角膜表層的初步實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2006年

3 馮小倩;人羊膜上皮細(xì)胞的性質(zhì)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

4 殷迪;人羊膜上皮細(xì)胞與肌基膜管支架相容性的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2008年

5 郭兵;大鼠羊膜上皮細(xì)胞體外向類神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化及其移植后對(duì)視神經(jīng)再生的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

6 韓慶賓;人羊膜上皮細(xì)胞修復(fù)放射性損傷小鼠唾液腺的實(shí)驗(yàn)研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2012年

7 李海建;利用羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚并修復(fù)裸鼠創(chuàng)面缺損[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

8 路煒;人羊膜上皮細(xì)胞水通道蛋白8的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2006年

9 徐彪;羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2013年

10 謝佳芯;bFGF轉(zhuǎn)染羊膜上皮細(xì)胞的建立及其對(duì)視神經(jīng)再生作用的初步研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

，

本文編號(hào)：1370262