本文關(guān)鍵詞：人羊膜上皮細胞的體外培養(yǎng)及標志分子的檢測分析　出處：《細胞與分子免疫學雜志》2014年12期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的進行人羊膜上皮細胞(HAEC)的體外培養(yǎng),觀察其生物學特性,檢測其分子特征。方法取剖宮產(chǎn)術(shù)后人羊膜,應用酶消化法獲得HAEC,倒置顯微鏡下觀察細胞生長變化;CCK-8法檢測HAEC的生長曲線;Giemsa染色觀察HAEC的克隆形成率;流式細胞術(shù)檢測HAEC的細胞周期;取第2代HAEC,流式細胞術(shù)檢測其CD29、CD31、CD44、CD59、CD105、CD117、CD133、HLA-DR的表達。免疫熒光法檢測其CD9、上皮性鈣黏素(E-cadherin)、足糖萼素樣蛋白(PODXL)、階段特異性胚胎表面抗原4(SSEA-4)、性別決定區(qū)Y相關(guān)因子2蛋白(SOX2)、SSEA-1、Nanog蛋白、八聚體結(jié)合蛋白3/4(Oct-3/4)的表達情況。結(jié)果酶消化法可以獲得較純的HAEC,細胞呈貼壁生長,呈多角形,核呈圓形。細胞在貼壁后第3天進入指數(shù)生長期。細胞周期分析顯示66%處于G0/G1期,S期細胞占31.69%,G2/M期細胞占2.31%。HAEC的克隆形成率為(9.33±2.00)%。流式細胞儀檢測顯示HAEC陽性表達CD44、CD29、CD105、CD59,不表達CD31、CD117、CD133、HLA-DR。免疫熒光法檢測顯示HAEC表達胚胎干細胞相關(guān)分子CD9、E-cadherin、PODXL、SSEA-4、SOX2、SSEA-1、Nanog、Oct-3/4。結(jié)論HAEC可以在體外培養(yǎng)生長并在一定時期內(nèi)保持其增殖活性;HAEC表達胚胎干細胞相關(guān)的表面標志分子。
[Abstract]:Objective to investigate the biological characteristics and molecular characteristics of human amniotic epithelial cells (HAECs) in vitro. Methods Human amniotic membrane was obtained after cesarean section and HAEC was obtained by enzyme digestion. Cell growth was observed under inverted microscope. The growth curve of HAEC was detected by CCK-8 method. The clone formation rate of HAEC was observed by Giemsa staining. The cell cycle of HAEC was detected by flow cytometry. The second passage HAECs were collected and the CD29 CD31, CD41, CD4, CD59, CD105, CD117 and CD133 were detected by flow cytometry. Expression of HLA-DR. CD9, E-cadherin, POD XLL were detected by immunofluorescence. The stage specific embryonic surface antigen (4) SSEA-4A and the sex-determining region Y related factor 2 protein (SOX2) were identified as SSEA-1 / Nanog protein. The expression of octamer binding protein 3 / 4 Oct-3 / 4). Results the purified HAECs could be obtained by enzyme digestion. The cells were adherent and polygonal. Cell cycle analysis showed that 66% cells were in G _ 0 / G _ 1 phase and S phase, 31.69% cells were in G _ 0 / G _ 1 phase. The colony formation rate of G2 / M phase cells was 9.33 鹵2.00. HAEC positive expression of CD44-CD29 was detected by flow cytometry. CD105, CD59, CD31, CD117, CD137, HLA-DR.Immunofluorescence assay showed that HAEC expressed CD9, a molecule associated with embryonic stem cells. E-cadherin PODXLSEA-4SOX2 SSEA-1Nanog. Conclusion HAEC can grow in vitro and maintain its proliferative activity for a certain period of time. HAEC expresses surface marker molecules associated with embryonic stem cells.
【作者單位】： 暨南大學附屬第一醫(yī)院眼科;
【基金】：國家自然科學基金(30872808,81100637) 暨南大學第一臨床醫(yī)學院科研培育專項基金(20120710)
【分類號】：R329
【正文快照】： 羊膜是位于羊膜腔內(nèi)的一層透明薄膜,無神經(jīng)、血管、淋巴管。人羊膜上皮細胞(human amnioticepithelial cells,HAEC)位于羊膜的胎兒面。研究表明HAEC是受精后第8天從外胚層發(fā)育而來,具有部分胚胎干細胞(embryonic stem cell,ESC)的特征。HAEC在不同生長因子和微環(huán)境的調(diào)節(jié)下,可

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