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五肽化合物CMS010.26對移植排斥和類風濕關節(jié)炎的治療作用及機理研究

發(fā)布時間:2018-01-02 12:02

  本文關鍵詞:五肽化合物CMS010.26對移植排斥和類風濕關節(jié)炎的治療作用及機理研究 出處:《天津醫(yī)科大學》2006年博士論文 論文類型:學位論文


  更多相關文章: T淋巴細胞 免疫抑制劑 移植排斥 類風濕關節(jié)炎 p56~(lck) P13K P85 P110


【摘要】:目的: 研究五肽化合物CMS010.26對同種移植排斥和類風濕關節(jié)炎的治療作用,并初步探討其通過p56~(lck)和P13K信號轉導途徑,抑制T淋巴細胞活化的作用機制。 方法: 1.MTT法觀察CMS010.26體外對單向MLR的影響;建立小鼠同種尾一背皮膚移植和耳后心肌移植模型,計算移植物平均生存時間,HE染色觀察CMS010.26對移植物的移植排斥病理損害的影響;免疫組化方法觀察CMS010.26對移植物的T淋巴細胞浸潤的影響。 2.建立大鼠AA模型,測量各組大鼠的踝關節(jié)周長,觀察CMS010.26對AA大鼠踝關節(jié)腫脹的治療作用,HE染色觀察CMS010.26對AA大鼠踝關節(jié)病理改變的抑制作用;MTT法觀察CMS010.26對AA大鼠T淋巴細胞增殖的抑制作用;免疫組化方法觀察CMS010.26對AA大鼠關節(jié)T淋巴細胞浸潤的影響。 3.MTT法觀察CMS010.26體外對Jurkat T細胞增殖的影響;應用免疫沉淀技術和ELISA試劑盒,檢測CMS010.26對Jurkat T細胞信號轉導蛋白p56~(lck)蛋白活性的影響;應用Western Blot方法,觀察CMS010.26對Jurkat T細胞p56~(lck)蛋白表達的影響;應用免疫沉淀技術和ELISA方法,檢測CMS010.26對Jurkat T細胞PI3K蛋白活性的影響;應用熒光實時定量PCR和Western Blot方法,觀察CMS010.26對Jurkat T細胞PI3K的調節(jié)亞基P85α和催化亞基P110α mRNA水平、P85和P85α蛋白表達的影響。 4.應用免疫沉淀技術和ELISA試劑盒,檢測CMS010.26對AA大鼠脾細胞p56~(lck)蛋白活性的影響;應用Western Blot方法,觀察CMS010.26對AA大鼠脾細胞p56~(lck)蛋白表達的影響;應用免疫沉淀技術和ELISA方法,檢測CMS010.26對AA大鼠脾細胞PI3K蛋白活性的影響;應用熒光實時定量PCR和Western Blot方法,觀察CMS010.26對AA大鼠脾細胞PI3K的P85α和P110α mRNA
[Abstract]:Objective: To study the therapeutic effect of pentapeptide compound CMS010.26 on allograft rejection and rheumatoid arthritis, and to explore its signal transduction pathway through p56 and P13K. The mechanism of inhibiting T lymphocyte activation. Methods: 1. The effect of CMS010.26 on unidirectional MLR in vitro was observed by MTT assay. The models of skin transplantation and myocardial transplantation were established, and the mean survival time of grafts was calculated. The effect of CMS010.26 on the pathological damage of graft rejection was observed by HE staining. Immunohistochemical method was used to observe the effect of CMS010.26 on T lymphocyte infiltration in grafts. 2. The AA model of rats was established, and the ankle circumference of each group was measured, and the therapeutic effect of CMS010.26 on ankle swelling in AA rats was observed. The inhibitory effect of CMS010.26 on the pathological changes of ankle joint in AA rats was observed by HE staining. The inhibitory effect of CMS010.26 on T lymphocyte proliferation in AA rats was observed by MTT method. Immunohistochemical method was used to observe the effect of CMS010.26 on T lymphocyte infiltration in AA rats. 3. The effect of CMS010.26 on the proliferation of Jurkat T cells in vitro was observed. Immunoprecipitation technique and ELISA kit were used to detect the effect of CMS010.26 on the activity of Jurkat T cell signal transduction protein p56 / lck. Western Blot method was used to observe the effect of CMS010.26 on the expression of p56 Western protein in Jurkat T cells. The effect of CMS010.26 on the activity of PI3K protein in Jurkat T cells was detected by immunoprecipitation and ELISA assay. Fluorescence real-time quantitative PCR and Western Blot were used. To observe the effect of CMS010.26 on PI3K regulatory subunit P85 偽 and catalytic subunit P110 偽 in Jurkat T cells. Effect of mRNA level on the expression of P85 and P85 偽 protein. 4. Immunoprecipitation technique and ELISA kit were used to detect the effect of CMS010.26 on the activity of p56hlckprotein in spleen cells of AA rats. Western Blot was used to observe the effect of CMS010.26 on the expression of p56 Western protein in spleen cells of AA rats. The effects of CMS010.26 on the activity of PI3K protein in spleen cells of AA rats were detected by immunoprecipitation and ELISA methods. Fluorescence real-time quantitative PCR and Western Blot were used to observe the effects of CMS010.26 on P85 偽 and P110 偽 mRNA of PI3K in spleen cells of AA rats.
【學位授予單位】:天津醫(yī)科大學
【學位級別】:博士
【學位授予年份】:2006
【分類號】:R392.5

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本文編號:1369125

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