本文關(guān)鍵詞：AIV（H9N2）NS1蛋白單抗的研制及單抗介導(dǎo)ELISA對(duì)AIV（H9N2）HA抗原表位變異研究　出處：《河南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：禽流感病毒(Avian Influenza Virus，AIV)的非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1)可作為一種區(qū)分野毒感染和滅活疫苗免疫雞群的鑒別診斷標(biāo)記，但不能區(qū)分AIV亞型，具有A型流感特異性。本文利用本河南農(nóng)業(yè)大學(xué)禽病研究所實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的含有H9N2亞型AIV NS1蛋白基因的重組表達(dá)載體陽(yáng)性菌，在37℃條件下，用終濃度1mmol／L的IPTG誘導(dǎo)表達(dá)5h，經(jīng)15％的SDS-PAGE分析，表明NS1基因在大腸桿菌中得到高效表達(dá)。用HisTrap HP Kit進(jìn)行復(fù)性和純化，獲得了純度較高、生物活性較好的NS1蛋白。以此NS1蛋白作為抗原免疫Balb／c小鼠，應(yīng)用雜交瘤技術(shù)，通過(guò)ELISA篩選，建立了2株抗H9N2亞型AIV NS1單克隆抗體(Monoclonal Antibody，McAb，簡(jiǎn)稱單抗)雜交瘤細(xì)胞株689和6C2，其分泌單抗抗能力穩(wěn)定。將2株雜交瘤細(xì)胞株分別注射小鼠收獲的腹水單抗效價(jià)分別為100×212和100×210。制備的單抗有良好的熱穩(wěn)定性和較高的特異性，，只與AIVNS1蛋白反應(yīng)，而與H5N2亞型AIV、H9N2亞型AIV、NDV、IBV、IBDV、ILTV、EDS76V均不發(fā)生反應(yīng)。NS1蛋白單抗的成功研制為利用該單抗開發(fā)一種快速、特異、敏感的鑒別野毒感染禽群和疫苗免疫禽群的方法及進(jìn)一步研制診斷試紙條或組裝成試劑盒奠定了基礎(chǔ)，也為深入研究NS1蛋白的結(jié)構(gòu)和功能奠定了良好的基礎(chǔ)，對(duì)AI的早期診斷、適時(shí)監(jiān)控和凈化具有重要現(xiàn)實(shí)意義。 目前H9亞型AI仍是我國(guó)的流行主型，由于AIV抗原性和致病力的易變異性及不同血清型毒株間缺乏交叉保護(hù)性，加大了AI防制的難度。本試驗(yàn)將本實(shí)驗(yàn)室已建立的4株抗H9N2亞型AIV血凝素(HA)單克隆抗體與保存的1998-2005年間的25株H9N2亞型AIV毒株進(jìn)行交叉ELISA試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)不同H9N2亞型AIV毒株血凝素(HA)抗原表位及毒力有明顯差異，可將25株H9N2型AIV毒株分為4類，進(jìn)一步證實(shí)了不同H9N2型AIV毒株HA抗原表位和毒力的變異性和多態(tài)性。其中2株毒株(A3和A18)比較特殊，與4株H9N2亞型AIV HA單抗均不發(fā)生反應(yīng)，缺少4株單抗所識(shí)別的HA抗原表位，但其毒力很強(qiáng)。對(duì)25株H9N2亞型AIV毒株進(jìn)行深入研究將對(duì)H9N2型AIV的防制在理論和實(shí)踐上均具有一定的指導(dǎo)意義。
[Abstract]:Avian Influenza Virus. The nonstructural protein NS1) can be used as a differential diagnostic marker to distinguish wild virus infection from inactivated vaccine immunized chicken population, but it can not distinguish AIV subtype. In this paper, the recombinant expression vector positive bacteria containing AIV NS1 gene of H9N2 subtype was constructed in the laboratory of the Institute of Poultry Disease, Henan Agricultural University. At 37 鈩

本文編號(hào)：1362260