本文關(guān)鍵詞：HPV58型衣殼蛋白L1和L2基因的克隆表達(dá)及病毒樣顆粒的裝配與免疫學(xué)分析　出處：《吉林大學(xué)》2005年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 人乳頭瘤病毒58型 主要衣殼蛋白 次要衣殼蛋白 病毒樣顆粒 桿狀病毒昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)

【摘要】：高危型HPV 感染與宮頸癌的發(fā)病密切相關(guān),其中16 和58 型是我國(guó)最常見的型別。為降低高危型HPV 感染的發(fā)生率和宮頸癌的發(fā)病率,制備預(yù)防HPV 感染的疫苗勢(shì)在必行。 由于HPV 難以通過(guò)體外組織培養(yǎng)或感染動(dòng)物而進(jìn)行繁殖,而且天然的HPV 感染病灶中獲得的HPV 顆粒量很少,不足以用于疫苗制備。分子生物學(xué)研究發(fā)現(xiàn)HPV 結(jié)構(gòu)蛋白的Ll 蛋白或L1 +L2 蛋白在真核細(xì)胞大量表達(dá)可以自發(fā)組裝成病毒樣顆粒(virus-like particles, VLP) 是目前公認(rèn)的最具前景的HPV 疫苗。但這種VLP 的中和活性具備型特異性,即一種型的VLP接種后只能對(duì)同型HPV 的感染起預(yù)防作用,而對(duì)其他型不起作用,因此有必要制備多型VLP。目前尚無(wú)關(guān)于HPV58 的VLP 的詳細(xì)報(bào)道,針對(duì)我國(guó)HPV58感染高發(fā)的特點(diǎn),本實(shí)驗(yàn)對(duì)HPV58-VLP 進(jìn)行了詳細(xì)的研究。 本實(shí)驗(yàn)首先應(yīng)用基因重組技術(shù)構(gòu)建了表達(dá)HPV58L1 和HPV58L1L2 共表達(dá)的重組桿狀病毒載體,感染昆蟲細(xì)胞后大量表達(dá)L1、L2 蛋白并進(jìn)行純化,形成由58L1單獨(dú)構(gòu)成的VLP和L1L2共同構(gòu)成的VLP。用它們分別免疫小鼠,制備相應(yīng)的抗血清。通過(guò)ELISA 和Western-blot 方法證明了58VLP 具備良好的免疫原性,由它制備的抗血清含有針對(duì)L1 的高滴度抗體。另外,應(yīng)用HPV58L1L2-VLP 重新包裝pSV/?-gal 質(zhì)粒制備HPV58 假病毒,通過(guò)抗血清對(duì)假病毒感染COS-1 細(xì)胞的阻斷實(shí)驗(yàn)證實(shí)了抗血清具備特異性中和活性。關(guān)鍵詞:人乳頭瘤病毒58型主要衣殼蛋白次要衣殼蛋白病毒樣顆粒桿狀病毒昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
[Abstract]:High risk HPV infection is closely related to the incidence of cervical cancer, of which 16 and 58 are the most common types in China. In order to reduce the incidence of high-risk HPV infection and cervical cancer incidence. It is imperative to prepare a vaccine to prevent HPV infection. Because HPV is difficult to propagate through tissue culture in vitro or infected animals, and the quantity of HPV particles in the natural HPV infected lesions is very small. Molecular biology has found that the expression of Ll protein or L1 L2 protein of HPV structural protein in eukaryotic cells can spontaneously assemble into virus-like particles (. Virus-like particles. VLP is the most promising vaccine for HPV, but its neutralization activity is type-specific. That is, one type of VLP inoculation can only prevent the infection of the same type of HPV, but not the other type. Therefore, it is necessary to prepare polytype VLP. At present, there is no detailed report on the VLP of HPV58, aiming at the high incidence of HPV58 infection in China. In this experiment, HPV58-VLP is studied in detail. In this experiment, the recombinant baculovirus vector expressing HPV58L1 and HPV58L1L2 was constructed by gene recombination technique. After infecting insect cells, a large number of L1 was expressed. The L2 protein was purified to form a VLP composed of 58L1 alone and L1L2. Mice were immunized with them. The corresponding antiserum was prepared and the immunogenicity of 58VLP was proved by ELISA and Western-blot. The antiserum prepared by it contains a high titer antibody against L1. In addition, HPV58L1L2-VLP was used to repackage pSVP? HPV58 pseudovirus was prepared by -gal plasmid. The specific neutralization activity of the antiserum against pseudovirus-infected COS-1 cells was confirmed by the blocking test of the antiserum. Human papillomavirus 58 main capsid protein minor capsid protein virus like baculovirus insect cell expression system
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1361423