本文關(guān)鍵詞：腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)小鼠卵受精率和囊胚形成率的影響　出處：《中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2006年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 體外受精 模型 巨噬細(xì)胞 共培養(yǎng) 小鼠卵 受精率 囊胚形成率

【摘要】：腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)小鼠卵受精率和囊胚形成率的影響 近年來(lái)子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EM)發(fā)病率不斷上升，約5％～15％的育齡期婦女受其影響，其與不育癥的關(guān)系日益成為研究的熱點(diǎn)，但其病因與發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，EM患者分泌的腹腔液增多，腹腔液中巨噬細(xì)胞數(shù)量增多、功能增強(qiáng)，腹腔液和血清中山巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子也明顯增多，且與病變程度成正比。這些與不育是否有關(guān)、關(guān)系如何，目前尚不十分清楚。國(guó)內(nèi)外的研究對(duì)巨噬細(xì)胞對(duì)囊胚形成的作用意見(jiàn)不一致。本研究擬通過(guò)建立小鼠體外受精模型，觀察巨噬細(xì)胞對(duì)小鼠卵子受精率和囊胚形成率的影響。 研究目的 一．建立小鼠體外受精模型 二．巨噬細(xì)胞對(duì)小鼠卵子受精率和囊胚形成率的影響 1．分離、培養(yǎng)及鑒定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞； 2．昆明小鼠精子提取； 3．昆明小鼠的藥物誘導(dǎo)排卵； 4．昆明小鼠的取卵； 5．小鼠卵子與巨噬細(xì)胞體外共培養(yǎng)，觀察其對(duì)小鼠卵受精率和囊胚形成率的影響。 研究方法 1．觀察小鼠不同周齡(＜8周，8周～10周，10～14周和＞14周)，不同體重(32克，32克～40克和)40克)，以及促排卵藥物不同劑量(5IU、10IU和15IU)和不同狀態(tài)(冷凍還是新鮮)下，，所取出鼠卵的數(shù)量和質(zhì)量，確定最佳的小鼠狀態(tài)和藥物劑量建立昆明小鼠體外誘導(dǎo)排卵模型。 2．利用冰鹽水對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔內(nèi)注射，誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，經(jīng)分離純化，通過(guò)鑒定證明收獲細(xì)胞約95％為巨噬細(xì)胞備用。 3．通過(guò)設(shè)立實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，取卵后隨機(jī)把卵分成三組：①對(duì)照組，進(jìn)行小鼠卵子單獨(dú)培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中不與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)；②實(shí)驗(yàn)組1：取卵后即與巨噬細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，觀察巨噬細(xì)胞作為共培養(yǎng)體系對(duì)小鼠卵子受精率和囊胚形成過(guò)程的影響；③實(shí)驗(yàn)組2：在受精50小時(shí)～55小時(shí)后，即在8細(xì)胞形成前后與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)進(jìn)行共培養(yǎng)，觀察巨噬細(xì)胞作為共培養(yǎng)體系對(duì)小鼠受精卵囊胚形成率的影響。 研究結(jié)果 1．建立的標(biāo)準(zhǔn)體外受精模型，以昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)材料，小鼠最佳周齡是10～14周，體重為32克～40克，所用促排卵藥物以HMG10IU和HCG10IU為最佳，取卵數(shù)量最多，質(zhì)量最好。 2．腹腔誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞經(jīng)過(guò)染色證明收獲細(xì)胞約95％為巨噬細(xì)胞，且一只小鼠腹腔收獲的細(xì)胞數(shù)目，如果在1個(gè)3653培養(yǎng)皿內(nèi)池中1ml培養(yǎng)液里約為10~6。 3．與未加巨噬細(xì)胞的對(duì)照組(受精率為91.0％)和實(shí)驗(yàn)組2(受精率為93.7％)比較，受精時(shí)即與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)組1受精率為72.0％，明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001)。在受精后與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)組2受精卵的囊胚形成率為78.2％明顯高于對(duì)照組的受精卵的囊胚形成率60.3％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001)。 4．受精后與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)組2的卵子囊胚形成率73.2％高于對(duì)照組的卵子囊胚形成率54.8％，差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高于實(shí)驗(yàn)組1的卵子囊胚形成率50.0％，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 5．任何一個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察都發(fā)現(xiàn)加巨噬細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組里的細(xì)胞分裂要快，提前約7～8小時(shí)，細(xì)胞分裂質(zhì)量好，碎片少，囊胚形成的時(shí)間提前。 結(jié)論 1．昆明小鼠的體外受精模型以10周～14周，32克～40克昆明小鼠為最佳，所用促排卵藥物以HMG10IU和HCG10IU為最佳，取出的卵子數(shù)量最多質(zhì)量最好。 2．受精階段與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)，可降低小鼠卵子的受精率。 3．與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì)受精卵的卵裂、胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育和囊胚形成有明顯的促進(jìn)作用。 4．在8細(xì)胞形成前后開(kāi)始添加巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)，能最大程度增加囊胚形成率。
[Abstract]:Effects of peritoneal macrophages on the fertilization rate and blastocyst formation rate of mouse eggs
In recent years, endometriosis (endometriosis, EM) the rising incidence of about 5% to 15% of women of childbearing age affected, its relationship with infertility has become a research hotspot, but its etiology and pathogenesis has not been fully elucidated, peritoneal fluid secretion in patients with EM increased, the number of macrophages in the peritoneal fluid. And enhance the function of cytokines in peritoneal fluid and serum Zhongshan macrophages also increased significantly, and the lesion is proportional to the degree. These are associated with infertility, how the relationship, is currently unclear. Research at home and abroad on the effect of macrophages on blastocyst formation views are not consistent. The purpose of this study was to establish in vitro fertilization of mouse model to observe the rate of macrophage, influence on the formation of the fertilization rate of eggs and mouse blastocysts.
research objective
1. Establishment of a model of in vitro fertilization in mice
Two. The effect of macrophage on the rate of fertilization and the rate of blastocyst formation in mice
1., the mouse peritoneal macrophages were cultured and identified.
2. sperm extraction from Kunming mice;
3. the drug induced ovulation in Kunming mice.
4. the eggs of Kunming mice were taken.
5. mouse eggs and macrophages were co cultured in vitro, and the effects on the fertilization rate and the blastocyst formation rate of mouse eggs were observed.
research method
1. mice of different ages (less than 8 weeks, 8 weeks to 10 weeks, 14 weeks and 10 to > 14 weeks), different weight (32 grams, 32 grams to 40 grams and 40 grams)), and ovulation induction with different doses (5IU, 10IU and 15IU) and different state (frozen or fresh), then the quantity and quality of egg, determine the ovulation inducing mouse model and the optimal dose of drugs to establish Kunming mice in vitro.
2., intraperitoneal injection of ice saline into mice was used to induce peritoneal macrophages production. After isolation and purification, 95% of the harvested cells were identified as macrophages.
3. through the establishment of experimental group and control group randomly after oocyte eggs into three groups: the control group, the mouse eggs cultured alone, and not in the training process of macrophage co culture; the experimental group: 1 oocytes after co cultured with macrophages, macrophage was observed as system on formation process of fertilization rate the egg and mouse blastocysts were cultured; the experimental group: 2 in 50 hours to 55 hours after fertilization, namely before and after the formation of macrophage in 8 cells were co cultured macrophages were cultured as the rate of observation system influence on the formation of mouse embryo blastocysts were cultured.
Research results
1. the standard in vitro fertilization model established by Kunming mice was 10~14 weeks and the body weight was 32 grams to 40 grams. The best ovulation agents were HMG10IU and HCG10IU. The number of eggs was the largest and the quality was the best.
2., peritoneal macrophages were stained by macrophages. About 95% of the harvested cells were macrophages, and the number of cells harvested from abdominal cavity in one mouse was 10~6. in the 1 culture medium of 3653 1ml.
The control group 3. with macrophages (the fertilization rate was 91% (2) and the experimental group fertilization rate was 93.7%), fertilization with macrophages co cultured in experimental group 1 fertilization rate of 72%, significantly decreased, the difference was statistically significant (P < 0.001). Co cultured with macrophages after fertilization in the experiment group 2 fertilized blastocyst formation rate was 78.2% higher than the control group obviously fertilized blastocyst formation rate was 60.3%, the difference was statistically significant (P < 0.001).
4. after fertilization, the percentage of blastocyst formation in 2 of the experimental group co cultured with macrophages was 73.2% higher than that of the control group. The difference in egg blastocyst formation rate was 54.8%. The difference was statistically significant. The ovum blastocyst formation rate was 1 higher than that in the experimental group 50%, with significant statistical difference.
5. at any time point, we found that the macrophages in the experimental group were faster than those in the control group, and about 7~8 hours earlier. The cell division quality was good, the fragments were few, and the time of blastocyst formation was ahead.
conclusion
1. the Kunming mouse's in vitro fertilization model is 10 weeks to 14 weeks, 32 grams to 40 grams of Kunming mice is the best, the best ovulation drugs are HMG10IU and HCG10IU, and the number of eggs taken is the best.
The 2. fertilization stage and macrophage co culture can reduce the fertilization rate of mouse eggs.
3. with macrophage co culture, the cleavage of the fertilized egg, the growth and development of the embryo and the formation of blastocyst were obviously promoted.
4. the macrophage co culture was added before and after the formation of 8 cells, and the rate of blastocyst formation could be increased to the maximum.

【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類(lèi)號(hào)】：R711.71;R711.6;R321

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張紅;林英立;陳業(yè)剛;劉曉強(qiáng);;大鼠勃起功能障礙模型的研究進(jìn)展[J];中國(guó)男科學(xué)雜志;2010年12期

2 杜紅姿;劉寒艷;龍曉林;;對(duì)前次體外受精失敗患者行部分卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射的臨床結(jié)局分析[J];廣東醫(yī)學(xué);2011年10期

3 趙素英;乜照燕;郭麗娜;張娜;甄秀麗;;體外受精-胚胎移植病人圍術(shù)期心理護(hù)理[J];護(hù)理研究;2011年17期

4 康健;王麗梅;王平;趙勇;張薇;韓文東;丁悅娜;孫志平;柏銀蘭;徐志凱;;小鼠結(jié)核分枝桿菌耐藥模型的建立與評(píng)價(jià)[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2011年04期

5 秦文松;劉英;段金良;;體外受精-胚胎移植中受精失敗的原因及補(bǔ)救措施[J];中國(guó)計(jì)劃生育和婦產(chǎn)科;2011年04期

6 黃茜;胡常紅;;淺談分步模型在“口腔修復(fù)學(xué)”教學(xué)中的應(yīng)用[J];實(shí)驗(yàn)室研究與探索;2011年07期

7 付金京;馬雅玲;何立東;強(qiáng)小鑫;;上鞏膜靜脈烙閉合并絲裂霉素C棉片貼敷建立大鼠慢性高眼壓模型[J];寧夏醫(yī)學(xué)雜志;2011年06期

8 熊莉娟;金環(huán);彭昕;孫靜;王瑛;;健康教育專(zhuān)職護(hù)士勝任力模型的構(gòu)建[J];護(hù)理研究;2011年16期

9 張國(guó)萍;郭蕾;;淺述肝郁脾虛證的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J];光明中醫(yī);2011年09期

10 周賢用;傅紅興;劉云西;李慧;徐逸;朱靚靚;;1例Beagle犬的糖尿病建模分析[J];中國(guó)醫(yī)藥科學(xué);2011年15期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 楊明全;許丹;王鋒;;幾種微量元素對(duì)小鼠卵母細(xì)胞成熟和體外受精的影響[A];全國(guó)首屆動(dòng)物生物技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

2 李永海;馬偉;王二耀;張東;焦麗紅;侯毅;王維華;;降低豬多精受精率的一種體外受精新方法[A];中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)全國(guó)顯微與亞顯微形態(tài)科學(xué)（細(xì)胞及分子顯微技術(shù)科學(xué)）分會(huì)第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2002年

3 吳紅;李厚達(dá);;小鼠體外受精和精子冷凍的研究[A];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

4 丁曉芳;官黃濤;田永紅;熊承良;;尿激酶型纖溶酶原激活因子對(duì)小鼠精子體外受精能力的影響[A];湘鄂贛首屆性與生殖健康學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2007年

5 陸湘;李路;高曉紅;吳煜;徐冰;孫曉溪;;控制性超促排卵過(guò)程中雌激素水平對(duì)于體外受精——胚胎移植結(jié)局的影響[A];第四屆長(zhǎng)三角婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨浙江省2009年婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

6 裴軼勁;王子淑;王喜忠;陳文元;;豬卵體外培養(yǎng)與體外受精[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

7 宋韜;劉柳;周楓;林小娜;張松英;;凍融胚胎作為超促排卵周期首次移植提高體外受精-胚胎移植治療效率的研究[A];第四屆長(zhǎng)三角婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨浙江省2009年婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

8 胡蓉蓉;高曉東;姚晶晶;蔣友進(jìn);;基于AMEsim和Simulink仿真平臺(tái)對(duì)空氣彈簧隔振效果的研究[A];四川省第九屆（2009年）汽車(chē)學(xué)術(shù)交流年會(huì)論文集[C];2009年

9 李超;潘建明;張相年;蔣琳蘭;;阿司匹林建立大鼠胚胎畸形模型的研究[A];2009年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第九屆中國(guó)藥師周論文集[C];2009年

10 朱詩(shī)兵;;模糊優(yōu)選評(píng)估系統(tǒng)[A];1995中國(guó)控制與決策學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];1995年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 高鵬程;合作何以發(fā)生:以“三人決斗”模型為例[N];昌吉日?qǐng)?bào);2009年

2 記者 郭曼;高新區(qū)新城產(chǎn)業(yè)基地 模型出爐[N];昆明日?qǐng)?bào);2010年

3 本報(bào)記者 汪敏華;紙模型,豈止是紙[N];解放日?qǐng)?bào);2010年

4 記者 陶小愛(ài)　通訊員 張紀(jì)捚 夏亮;省內(nèi)自主研發(fā) 海陸空模型登陸長(zhǎng)沙[N];湖南日?qǐng)?bào);2010年

5 記者 劉霞;體外受精新突破：挑出最健康胚胎[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

6 麥迪信;無(wú)針裝置體外受精更便捷[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

7 筆夫;市場(chǎng)完美演繹滯脹模型[N];華夏時(shí)報(bào);2011年

8 記者 邵長(zhǎng)春　特約記者 李玉峰 通訊員 青云;全國(guó)青少年航海模型總決賽在陵水舉行[N];海南日?qǐng)?bào);2009年

9 本報(bào)記者 李蕾;“國(guó)字號(hào)”大客機(jī)模型在滬首秀[N];解放日?qǐng)?bào);2009年

10 本報(bào)記者 何方;模型之魅[N];重慶日?qǐng)?bào);2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 賈長(zhǎng)青;椎間盤(pán)退變，營(yíng)養(yǎng)途徑，形態(tài)及細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)性研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2003年

2 李貴孚;基于特征價(jià)格理論的我國(guó)有線數(shù)字電視產(chǎn)品價(jià)格模型研究[D];吉林大學(xué);2007年

3 袁寶招;水資源需求驅(qū)動(dòng)因素及其調(diào)控研究[D];河海大學(xué);2006年

4 趙世剛;中國(guó)商業(yè)銀行企業(yè)文化測(cè)度研究[D];大連理工大學(xué);2007年

5 廖亞立;生命價(jià)值的動(dòng)態(tài)評(píng)估方法與實(shí)證研究[D];中國(guó)地質(zhì)大學(xué)（北京）;2008年

6 余明楊;變壓器隔離全橋開(kāi)關(guān)變換器的建模與應(yīng)用技術(shù)研究[D];中南大學(xué);2008年

7 趙海翔;風(fēng)電引起的電壓波動(dòng)和閃變研究[D];中國(guó)電力科學(xué)研究院;2005年

8 王伯珉;預(yù)構(gòu)皮瓣治療四肢嚴(yán)重?fù)p傷的動(dòng)物模型與實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2004年

9 劉燕;超臨界流體制備超微顆粒的過(guò)程模擬與噴嘴設(shè)計(jì)[D];山東大學(xué);2005年

10 關(guān)宏信;瀝青混合料粘彈性疲勞損傷模型研究[D];中南大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 唐紅星;豬卵巢卵母細(xì)胞體外成熟與體外受精的研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

2 崔凱;鹿卵母細(xì)胞體外成熟與體外受精的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2004年

3 石少權(quán);小鼠卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)及體外受精研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

4 張t;牛卵母細(xì)胞孤雌激活與體外受精[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2002年

5 郭憲;牛卵母細(xì)胞體外成熟與體外受精的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

6 陳永昌;獼猴體外受精的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

7 郝澤東;屠宰山羊有腔卵母細(xì)胞體外成熟和體外受精的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

8 Sristee Shrestha Prajapati;子宮內(nèi)膜異位癥不孕患者體外受精—胚胎移植結(jié)局分析[D];鄭州大學(xué);2007年

9 馬云;牛卵泡卵母細(xì)胞體外成熟、體外受精及受精卵體外培養(yǎng)的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2001年

10 朱軍;大鼠胰腺移植模型的建立及趨化因子在移植排斥反應(yīng)中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2005年

本文編號(hào)：1359334