本文關(guān)鍵詞：真核表達(dá)載體pEGFP-C2-GATA-4的構(gòu)建及其在P19細(xì)胞中的表達(dá)　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 轉(zhuǎn)錄因子 GATA-4 真核表達(dá)載體 克隆 表達(dá) 心肌 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

【摘要】： 目的:移植不同來源的干細(xì)胞以修復(fù)梗死的心肌組織、改善心功能已成為目前研究的熱點(diǎn)。雖然人們已成功地將非心源性的干細(xì)胞(如胚胎干細(xì)胞、造血干細(xì)胞和骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞等),移植至梗死的心肌區(qū)域并觀察到它們分化成心肌樣細(xì)胞,但是對(duì)于這一橫向分化的具體機(jī)制所知甚少。目前移植技術(shù)的發(fā)展,體內(nèi)外調(diào)控干細(xì)胞向心肌定向分化的因素和作用機(jī)制的探討均提示:通過移植干細(xì)胞再生心肌以治療心肌梗死疾病已經(jīng)具有一定的理論基礎(chǔ)而且擁有廣闊的應(yīng)用前景。目前尚需進(jìn)一步研究明確干細(xì)胞向心肌細(xì)胞的定向分化調(diào)控因素與機(jī)制,以提高干細(xì)胞的心肌分化,加速干細(xì)胞安全可靠地應(yīng)用于臨床。 GATA-4是胚胎期心臟發(fā)生發(fā)育過程中起重要作用的轉(zhuǎn)錄因子,參與心臟前體細(xì)胞的分化、心臟的環(huán)化、房室分隔、傳導(dǎo)系統(tǒng)及成熟心臟正常功能的維持。GATA-4主要通過其特有的鋅指結(jié)構(gòu)在胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用,當(dāng)GATA-4基因發(fā)生缺失或突變時(shí)就會(huì)引起各種心臟疾病。GATA-4因子是心臟前體細(xì)胞的最早期標(biāo)志之一,對(duì)于心臟發(fā)育是必不可少的。GATA-4因子首先在心前期中胚層中表達(dá),隨后在心內(nèi)膜和心肌中表達(dá)。GATA-4因子調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞的發(fā)生、分化以及心肌前體細(xì)胞形成線狀心管。GATA-4的表達(dá)對(duì)心肌細(xì)胞標(biāo)志物的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)至關(guān)重要。P19胚胎癌細(xì)胞(embryonal carcinoma cells,EC)經(jīng)誘導(dǎo)可分化為包括心肌在內(nèi)的多種細(xì)胞,在P19細(xì)胞向心肌分化的過程中,其細(xì)胞發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)及電生理特性與正常小鼠心肌發(fā)育過程相似,且該細(xì)胞易于進(jìn)行基因操作,是研究心肌細(xì)胞發(fā)育的良好體外模型。 為進(jìn)一步研究轉(zhuǎn)錄因子GATA-4在心臟發(fā)育及心肌分化中的作用,本研究構(gòu)建了含有小鼠GATA-4編碼框的pEGFP-C2-GATA-4真核表達(dá)載體,并在P19細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)成功,為進(jìn)一步研究心特異轉(zhuǎn)錄因子的功能及調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 方法: 1以真核表達(dá)質(zhì)粒pEFSA-GATA-4為模板,PCR擴(kuò)增得到小鼠GATA-4基因片段,將目的片段亞克隆到pEGFP-C2載體,卡那霉素篩選陽性克隆,經(jīng)菌落PCR、酶切鑒定和測序鑒定正確。2將重組質(zhì)粒pEGFP-C2-GATA4以脂質(zhì)體法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染P19細(xì)胞,以免疫細(xì)胞化學(xué)、共聚焦掃描顯微鏡、PCR、免疫印記法檢測GATA-4-EGFP融合蛋白在P19細(xì)胞中的表達(dá)。 結(jié)果: 1經(jīng)PCR獲得1325bp的產(chǎn)物,經(jīng)酶切、DNA測序,確定所擴(kuò)增片段為GATA-4基因cDNA,進(jìn)而成功篩選出表達(dá)載體pEGFP-C2-GATA-4。2轉(zhuǎn)染后的P19細(xì)胞中通過免疫細(xì)胞化學(xué),RT-PCR,Western blot等方法分別從基因和蛋白水平證明P19細(xì)胞中有GATA-4基因的表達(dá)。 結(jié)論:獲得編碼GATA-4的基因片段,并成功構(gòu)建了其真核表達(dá)載體pEGFP-C2-GATA-4。在其轉(zhuǎn)染的P19細(xì)胞中有GATA-4基因表達(dá)。GATA-4基因cDNA真核表達(dá)載體的成功構(gòu)建以及在P19細(xì)胞中的表達(dá)的特點(diǎn)顯示了極具意義的潛在應(yīng)用價(jià)值。心臟發(fā)育的轉(zhuǎn)錄調(diào)控是個(gè)極其復(fù)雜的過程,是一個(gè)多種轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子參與的聯(lián)合協(xié)同運(yùn)作的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng),而GATA-4因子在其中扮演關(guān)鍵的角色。GATA-4因子不僅調(diào)控心臟結(jié)構(gòu)基因的表達(dá),而且還調(diào)控許多其它轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的表達(dá)。由GATA-4因子出發(fā)我們可以繪制出一份復(fù)雜的心臟發(fā)育轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò),不僅可以增進(jìn)我們對(duì)心臟發(fā)育分子調(diào)控機(jī)制的認(rèn)識(shí),還可以增進(jìn)對(duì)心臟疾病發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí),使心臟疾病早期干預(yù)和基因治療成為可能,為根治心臟疾病提供了一條切實(shí)有效的途徑。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R346

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周云;何曉宇;;轉(zhuǎn)錄因子GATA-4在人胎心發(fā)育中的表達(dá)[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2008年04期

2 林釗,周春燕;轉(zhuǎn)錄因子Nkx2-5和GATA-4在胚胎心肌發(fā)育早期的作用[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2002年06期

3 方翔;丁建東;;轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5和GATA-4在心臟發(fā)育中的作用[J];醫(yī)學(xué)綜述;2009年22期

4 毓勤;;FK506和環(huán)孢素A阻斷T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的核聯(lián)系[J];國外醫(yī)學(xué)情報(bào);1992年07期

5 王金泉,劉志紅;糖皮質(zhì)激素免疫抑制作用機(jī)理的新認(rèn)識(shí)[J];腎臟病與透析腎移植雜志;1997年02期

6 田文洪,汪明春,李楊秋,楊力健;RT-PCR檢測血液病中GATA-3基因表達(dá)[J];臨床血液學(xué)雜志;1998年02期

7 陳偉;一種新的轉(zhuǎn)錄因子——EPAS1[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2000年04期

8 李揚(yáng)秋,楊力建,陳少華,盧育洪,張洹;急性非淋巴細(xì)胞白血病中轉(zhuǎn)錄因子GATA-2基因插入突變[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2000年04期

9 李曉青,曾水清,徐莉莉,程揚(yáng);血清誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子E2F1的表達(dá)及活化[J];中華眼底病雜志;2002年03期

10 陳萍,常才;先天性心臟病相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Csx/Nkx2.5基因的研究[J];國外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊;2004年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 高峰;夏瑞強(qiáng);熊愛生;肖寧;洪義歡;姚泉洪;陳建民;;水稻AP2/EREBP類轉(zhuǎn)錄因子基因的功能研究[A];江蘇省遺傳學(xué)會(huì)植物分子育種學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2007年

2 邸鵬;陳萬生;張磊;;構(gòu)建“轉(zhuǎn)錄因子-啟動(dòng)子”耦聯(lián)載體開展植物生物堿次生代謝工程[A];中國植物學(xué)會(huì)七十五周年年會(huì)論文摘要匯編（1933-2008）[C];2008年

3 吳艷;徐嵐;周迎會(huì);吳士良;;人類β1，3半乳糖基轉(zhuǎn)移酶7(UDP-Gal：betaGlcNAc beta 1，3-galactosyltransferase polypeptide 7)催化功能的研究以及該基因表達(dá)與轉(zhuǎn)錄因子ets-1的相關(guān)性的探索[A];2008年全國糖生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2008年

4 吳艷;徐嵐;吳士良;;人類β3GalT7/GNT8 (UDP-Gal:betaGlcNAc beta 1，3-galactosyltransferase polypeptide 7)催化功能的研究以及該基因表達(dá)與轉(zhuǎn)錄因子ets-1的相關(guān)性的探索[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

5 李肖霞;宋一萌;朱振久;付成來;李承紅;朱毅;;轉(zhuǎn)錄因子KLFs在血管內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖分化中的作用[A];第七屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2009年

6 李蕾;謝丙炎;戴小楓;楊宇紅;;辣椒抗病相關(guān)WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因的分離及特征分析[A];中國植物病理學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

7 郭振飛;趙雅清;;黃花苜蓿EREBP基因的克隆、表達(dá)及功能鑒定[A];2007年全國植物生長物質(zhì)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2007年

8 鄭毅;陳永平;;轉(zhuǎn)錄因子FoxO1與肝纖維化[A];傳染病診治高峰論壇暨2007年浙江省感染病學(xué)、肝病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

9 周賢堯;劉紅霞;董娜;張?jiān)銎G;;抗性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子TaPIMP1基因的分離和功能的初步研究[A];2009年中國作物學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2009年

10 馬有志;徐兆師;;植物抗逆相關(guān)基因及其在育種中的應(yīng)用[A];中國糧食安全戰(zhàn)略——第九十次中國科協(xié)青年科學(xué)家論壇文集[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 王小龍;科學(xué)家提高了多功能干細(xì)胞安全性[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

2 白毅;UXT蛋白可增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄因子NF—κB活性[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

3 香港麥迪信醫(yī)學(xué)出版有限公司 供稿;凋亡與腫瘤：一對(duì)矛盾的連體嬰[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

4 陳勇;專家有突破　借助基因殺死癌細(xì)胞[N];人民日?qǐng)?bào);2005年

5 本報(bào)記者 馮衛(wèi)東;向左分裂向右分化[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

6 記者胡德榮;我國科學(xué)家培育出豬“萬能”干細(xì)胞[N];健康報(bào);2009年

7 記者 陳勇;美專家繪出大腦關(guān)鍵區(qū)域基因“分布圖”[N];新華每日電訊;2004年

8 胡德榮;我國揭示NF—κB細(xì)胞核內(nèi)調(diào)控新機(jī)制[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

9 黃蘇榕;中科院上海神經(jīng)所發(fā)現(xiàn)中、小腦發(fā)育不全分子機(jī)制[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

10 白毅;β—arrestin1蛋白核內(nèi)新功能被發(fā)現(xiàn)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 白延紅;煙草花青素合成相關(guān)基因及轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆與功能驗(yàn)證研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

2 莊靜;大白菜和甘藍(lán)型油菜AP2/ERF家族轉(zhuǎn)錄因子的克隆與分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

3 高建杰;蘋果兩個(gè)MYB轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆與功能分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

4 邱志剛;小麥DREB/ERF轉(zhuǎn)錄因子相互作用蛋白質(zhì)的篩選與驗(yàn)證[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

5 姚春霞;GATA轉(zhuǎn)錄因子對(duì)心肌能量代謝及細(xì)胞增殖的調(diào)控機(jī)制研究[D];鄭州大學(xué);2012年

6 趙玨;轉(zhuǎn)錄因子Spr2調(diào)控中胚層形成和神經(jīng)外胚層后部化[D];清華大學(xué);2004年

7 李雪平;大豆DREB類轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

8 何莉;轉(zhuǎn)錄因子CTCF的功能研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

9 張軍;熱休克轉(zhuǎn)錄因子4基因突變致先天性白內(nèi)障分子機(jī)理研究[D];河南大學(xué);2010年

10 張穎;黃瓜低溫脅迫應(yīng)答轉(zhuǎn)錄因子CsWRKY46和CsWRKY21的表達(dá)特征與功能分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 高哲;基于PWMSA算法擬南芥協(xié)同基因調(diào)控的預(yù)測[D];吉林大學(xué);2009年

2 楊紅梅;赤霉素相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子NBF的進(jìn)一步功能分析[D];新疆大學(xué);2005年

3 張傳慶;T-bet/IFN-γ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在重型再生障礙性貧血發(fā)病機(jī)制中的作用[D];蘇州大學(xué);2008年

4 趙學(xué)強(qiáng);通心絡(luò)對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心肌重構(gòu)干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2008年

5 韓巧玲;大豆重要抗逆相關(guān)基因GmE2、GmNAC2a的特性分析及功能鑒定[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

6 殷建文;低溫脅迫條件下擬南芥全細(xì)胞蛋白質(zhì)的雙向電泳分析[D];吉林大學(xué);2005年

7 黃欣瓊;人類心臟發(fā)育候選基因ZNF569的研究[D];湖南師范大學(xué);2005年

8 李蕾;辣椒抗病相關(guān)CaWRKY轉(zhuǎn)錄因子基因的分離及特性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

9 王宏剛;一個(gè)擬植物轉(zhuǎn)錄因子家族的初步研究[D];廈門大學(xué);2008年

10 閔瑞雋;基于支持向量機(jī)的在全基因組范圍內(nèi)建立預(yù)測調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的研究[D];上海師范大學(xué);2009年

，

本文編號(hào)：1352944